【摘要】：目的人宮頸癌細(xì)胞(Hela)中表達(dá)Ⅱ型單純皰疹病毒(HSV-2)潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄體(LAT)編碼的microRNA-H3(miR-H3),檢測(cè)該mRNA對(duì)Hela細(xì)胞活性的影響。方法 PCR擴(kuò)增microRNA-H3的前體序列,將其插入到pmRmcherry(cherry)載體中,并酶切測(cè)序同時(shí)驗(yàn)證;重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,q PCR檢測(cè)microRNA的相對(duì)表達(dá)水平,轉(zhuǎn)染受體細(xì)胞,并用放線(xiàn)菌素D(Act D)誘導(dǎo)凋亡,MTT法、流式細(xì)胞術(shù)和Edu染色共同檢測(cè)Hela細(xì)胞活性。結(jié)果雙酶切、測(cè)序表明cherry/miR-H3重組質(zhì)粒構(gòu)建成功,q PCR檢測(cè)miR-H3大量表達(dá),MTT法、Edu染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)表明轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒cherry/miR-H3并經(jīng)誘導(dǎo)凋亡組細(xì)胞的活性明顯比空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞活性高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而與正常細(xì)胞對(duì)照組無(wú)顯著差異。結(jié)論 cherry/miR-H3真核表達(dá)載體可在Hela細(xì)胞中高效表達(dá),并具有抗Act D誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of herpes simplex virus (HSV-2) latent associated transcripts (miR-H3) encoding microRNA-H3 (miR-H3) on the activity of human cervical cancer cell line (Hela). Methods the precursor sequence of microRNA-H3 was amplified by PCR and inserted into pmRmcherry (cherry) vector. The relative expression of microRNA was detected by, q PCR in Hela cells transfected with recombinant plasmid, and the apoptosis was induced by actinomycin D (Act D). The activity of Hela cells was detected by MTT, flow cytometry and Edu staining. Results double enzyme digestion and sequencing showed that the recombinant plasmid of cherry/miR-H3 was successfully constructed to detect the large amount of miR-H3 expression, and the MTT method was used to detect the expression of miR-H3. Edu staining and flow cytometry analysis showed that the activity of the cells transfected with recombinant plasmid cherry/miR-H3 and induced apoptosis was significantly higher than that of the empty plasmid transfection group and the untransfected group, and the cell activity was significantly higher than that of the blank plasmid transfection group and the untransfected group. There was no significant difference between the control group and the control group. Conclusion cherry/miR-H3 eukaryotic expression vector can be highly expressed in Hela cells and can inhibit apoptosis induced by Act D.
【作者單位】： 華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院;廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院皮膚科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助(編號(hào)81171511)靶向HSV-2潛伏復(fù)發(fā)的microRNA的篩選及作用研究(起止年月:(2012.01-2015.12);此研究項(xiàng)目獲軍隊(duì)醫(yī)療成果二等獎(jiǎng)(省部級(jí));證書(shū)編號(hào)(2013-2-28-1)
【分類(lèi)號(hào)】：R373

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