【摘要】：目的研究ski基因?qū)Υ笫笮切文z質(zhì)細(xì)胞增殖的影響及其分子機制。方法分離3日齡Sprague-Dawley大鼠腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞,體外培養(yǎng)。合成ski和陰性對照小干擾片段。設(shè)置ski-si RNA組、陰性對照組和空白對照組,采用脂質(zhì)體法將特異性針對ski基因的si RNA和陰性對照si RNA轉(zhuǎn)入ski-si RNA組、陰性對照組星形膠質(zhì)細(xì)胞中。Western blotting分析ski、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)和Cyclin D1蛋白表達(dá);CCK8法檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖活力;流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期。結(jié)果 ski-si RNA組星形膠質(zhì)細(xì)胞ski蛋白表達(dá)明顯降低(F=38.611,P0.01),GFAP(F=7.547,P0.05)和Cyclin D1蛋白(F=3.901,P0.05)表達(dá)降低;培養(yǎng)12 h后,ski-si RNA組增殖活力明顯降低(F30.507,P0.01),G1期細(xì)胞比例明顯增加,S期明顯減少(F48.425,P0.01)。結(jié)論沉默ski基因可能通過下調(diào)Cyclin D1表達(dá),抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖。
[Abstract]:Objective to study the effect of ski gene on astrocyte proliferation and its molecular mechanism. Methods the cortical astrocytes of 3 day old Sprague-Dawley rats were isolated and cultured in vitro. The small interference fragments of ski and negative control were synthesized. In ski-si RNA group, negative control group and blank control group, si RNA specific for ski gene and negative control si RNA were transferred into ski-si RNA group by liposome method. Ski, in astrocytes of negative control group was analyzed by. Western blotting. The expression of glial fibrillary acidic protein (GFAP) (GFAP) and Cyclin D1 protein; The proliferative activity of astrocytes was detected by CCK8 and the cell cycle was detected by flow cytometry. Results the expression of ski protein and Cyclin D1 protein in astrocytes of ski-si RNA group were significantly decreased (P 0.05) and Cyclin D1 protein (FN 3.901P 0.05). After 12 hours of culture, the proliferation activity of ski-si RNA group was significantly decreased (F30.507, P0.01), the proportion of cells in G1 phase was obviously increased, and that in S phase was significantly decreased (F48.425, P0.01). Conclusion silencing ski gene may inhibit the proliferation of astrocytes by down-regulating the expression of Cyclin D1.
【作者單位】： 蘭州大學(xué)第二醫(yī)院骨科;甘肅省骨關(guān)節(jié)疾病研究重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(No.30772299) 蘭州大學(xué)第二醫(yī)院科研基金項目(No.sdkyjj-04)
【分類號】：R3416

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本文編號：2401335