【摘要】：粒細胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor, G-CSF)是由單核巨噬細胞、成纖維細胞和內(nèi)皮細胞等產(chǎn)生的一種造血生長因子,與細胞表面的特定受體G-CSFR (CD114)結(jié)合,促進中性粒細胞系造血祖細胞生長和分化,保護中性粒細胞避免凋亡并加強它們的功能,成為防治由各種原因引起的粒細胞減少癥的有效藥物。近十年來,G-CSF在臨床上應(yīng)用于骨髓移植患者,動員捐贈者骨髓中造血干細胞和間充質(zhì)干細胞到受者外周血中,實現(xiàn)了外周血造血干細胞的移植。目前研究發(fā)現(xiàn),G-CSF可以通過血腦屏障,具有中樞神經(jīng)系統(tǒng)的保護作用,大大擴展了G-CSF的臨床應(yīng)用。 對中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的組織給予G-CSF治療能夠在損傷區(qū)域內(nèi)誘導(dǎo)新的神經(jīng)和血管形成,降低組織損害,減少梗死體積和提高神經(jīng)功能。本實驗室課題組用G-CSF動員神經(jīng)干細胞治療小鼠的缺血缺氧性腦損傷,而且,G-CSF能夠促進SVZ和DG等區(qū)內(nèi)源性NSCs的增殖,這將為G-CSF治療神經(jīng)損傷相關(guān)疾病的臨床應(yīng)用提供新的思路。 脊髓損傷是一種嚴重危害生命健康的疾病,關(guān)于脊髓損傷的研究數(shù)不勝數(shù)。小膠質(zhì)細胞(microglia, MG)作為神經(jīng)系統(tǒng)具有代表性的免疫細胞,廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng),對神經(jīng)元起著支持、營養(yǎng)、保護及修復(fù)等重要作用。小膠質(zhì)細胞猶如一把“雙刃劍”在神經(jīng)系統(tǒng)損傷、疾病等病理狀態(tài)下具有不同的形態(tài)功能和免疫活性,能夠發(fā)揮保護和破壞雙重作用。Gordon S根據(jù)巨噬細胞激活的信號通路不同將其分為兩型：經(jīng)典激活型(M1型)和選擇激活型(M2型),兩型細胞具有不同的免疫學(xué)表型和功能。M1型細胞通過分泌不同的細胞因子促進炎癥的發(fā)生、抑制腫瘤的形成。M2型吞噬功能活躍、抑制炎癥反應(yīng)、促進組織再生修復(fù)。因此,積極研究小膠質(zhì)細胞對脊髓損傷的保護作用,抑制其損害作用,對脊髓損傷的修復(fù)有著重要意義。本研究主要觀察在脊髓損傷模型中G-CSF對小膠質(zhì)細胞M1神經(jīng)損傷型/M2神經(jīng)保護型雙重角色轉(zhuǎn)化的影響,并初步探討G-CSF對小膠質(zhì)細胞可能的作用機制。 第一部分G-CSF對小鼠脊髓損傷后運動能力的恢復(fù)及體內(nèi)小膠質(zhì)細胞激活及分布的影響 首先建立小鼠脊髓右側(cè)半切損傷模型,造模成功術(shù)后給予粒細胞集落刺激因子,連續(xù)3d,進行Basso-Beattie-Bresnahan (BBB)評分,評價小鼠運動功能。取脊髓切片進行免疫熒光染色檢測G-CSFR在小膠質(zhì)細胞上的表達、小膠質(zhì)細胞激活、募集數(shù)目和形態(tài)的變化以及灰白質(zhì)內(nèi)小膠質(zhì)細胞分布的差異。實驗結(jié)果表明,G-CSF可以促進小鼠運動功能的恢復(fù),并激活小膠質(zhì)細胞,促進小膠質(zhì)細胞向損傷處募集。 第二部分G-CSF對體外脊髓損傷條件下小膠質(zhì)細胞的影響 免疫熒光染色和RT-PCR技術(shù)檢測BV2小膠質(zhì)細胞膜上G-CSFR的表達。MTT檢測G-CSF對小膠質(zhì)細胞活性的影響。利用損傷脊髓的組織上清液模擬體外脊髓損傷環(huán)境,檢測應(yīng)用G-CSF后M1型/M2型小膠質(zhì)細胞相關(guān)基因的表達,以及炎癥細胞因子的mRNA水平。Western blotting檢測應(yīng)用G-CSF后小膠質(zhì)細胞NF-кB信號通路p65的活性及stat3、p-stat3表達量的改變。G-CSF可以調(diào)節(jié)體外小膠質(zhì)細胞M1型/M2型基因的表達,治療組M1型mRNA表達量較損傷組降低,G-CSF促進M2型mRNA表達,并延長其存在時間。G-CSF治療后IL-1β、TNFα、iNOS mRNA水平明顯降低,抗炎因子TGFβ、IL-10mRNA表達水平上升。G-CSF通過下調(diào)小膠質(zhì)細胞NF-кB信號通路p65的活性及促進stat3磷酸化發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。體外實驗結(jié)果表明,G-CSF可以調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細胞的極化過程,并調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細胞分泌炎癥因子發(fā)揮神經(jīng)保護作用。 總之,通過本研究我們發(fā)現(xiàn),G-CSF可以調(diào)節(jié)體內(nèi)小膠質(zhì)細胞的激活促進運動功能的恢復(fù),而且可以調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細胞極化過程和細胞因子的分泌從而使其發(fā)揮神經(jīng)保護作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R-332;R651.2

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本文編號：2346628