【摘要】：目的探討節(jié)律性壓力波維持氣道黏蛋白(MUC)基礎(chǔ)性分泌的主要信號節(jié)點。方法采用氣/液相界面法培養(yǎng)人氣道上皮16HBE細(xì)胞,模擬正常呼吸所產(chǎn)生的節(jié)律性壓力波作用于培養(yǎng)細(xì)胞,分為靜態(tài)對照組、節(jié)律性壓力波組、節(jié)律性壓力波+張力敏感性陽離子通道(TRPV4)拮抗劑釕紅、節(jié)律性壓力波+維拉帕米、節(jié)律性壓力波+蛋白激酶C抑制劑(GF109203x)共5組,通過激光共聚焦觀察Ca2+濃度變化,RT-PCR檢測TRPV4mRNA表達(dá),West-ern bolt檢測MARCKS及SNAP-23水平,ELISA檢測MUC(2、5AC和5B)分泌情況。結(jié)果節(jié)律性壓力波組胞內(nèi)Ca2+濃度(312.34±17.08)和TRPV4 mRNA(0.63±0.03)較靜態(tài)對照組(196.16±35.06,0.28±0.05)顯著增高(P0.01),RR干預(yù)后明顯降低(P0.01);同時MUC(2、5AC和5B)分泌,pMARCKS及pSNAP-23蛋白水平明顯增高(P0.01),給予Ca2+及PKC抑制劑預(yù)處理后,上述各指標(biāo)蛋白均降低(P0.01)。結(jié)論 TRPV4參與節(jié)律性壓力波維持氣道上皮基礎(chǔ)性MUC分泌平衡,此過程籍以激活Ca2+/PKC/MARCKS信號通路實現(xiàn)。
[Abstract]:Objective to investigate the main signal node of rhythmic pressure wave in maintaining the basic secretion of airway mucin (MUC). Methods Human airway epithelial 16HBE cells were cultured by gas / liquid interface method. The cultured cells were exposed to rhythmic pressure waves produced by normal respiration. The cells were divided into static control group and rhythmic pressure wave group. Ruthenium red, rhythmic pressure wave verapamil and rhythmic pressure wave protein kinase C inhibitor (GF109203x), antagonists of rhythmic pressure wave tension-sensitive cationic channel (TRPV4), were used to observe the concentration of Ca2 in 5 groups. TRPV4mRNA expression was detected by RT-PCR, MARCKS and SNAP-23 were detected by West-ern bolt, and MUC (22AC and 5B) secretion was detected by ELISA. Results the concentrations of intracellular Ca2 (312.34 鹵17.08) and TRPV4 mRNA (0.63 鹵0.03) in the rhythmic pressure wave group were significantly higher than those in the static control group (196.16 鹵35.06 鹵0.28 鹵0.05). At the same time, MUC (2C5AC and 5B) secretion, pMARCKS and pSNAP-23 protein levels were significantly increased (P0.01). After pretreatment with Ca2 and PKC inhibitor, the above indexes were all decreased (P0.01). Conclusion TRPV4 is involved in rhythmic pressure wave to maintain the secretion balance of basic MUC in airway epithelium, which is realized by activating Ca2 / PKC/MARCKS signaling pathway.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院呼吸內(nèi)科;俄羅斯醫(yī)學(xué)科學(xué)院遠(yuǎn)東呼吸生理與病理研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31171346);國家自然科學(xué)基金中俄國際合作項目(81011120108) 中俄政府間合作項目(2009:13-01)
【分類號】：R332

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2346380