【摘要】：目的:本部分的研究通過檢測(cè)胚胎大鼠脊髓源神經(jīng)干細(xì)胞在RNA干擾Hes1基因后定向誘導(dǎo)分化為膽堿能神經(jīng)元過程中對(duì)Mash1基因的影響,探討神經(jīng)干細(xì)胞定向分化為膽堿能神經(jīng)元的分化機(jī)制。 方法:將孕齡17d的胚胎大鼠脊髓組織制備成單細(xì)胞懸液,接種到限定性無血清培養(yǎng)液中培養(yǎng),待原代克隆球形成后單純誘導(dǎo)組加入誘導(dǎo)因子RA、SHH、NT-3和BDNF對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化;干擾組加入干擾因子siRNA6小時(shí)之后,再加入同上的誘導(dǎo)因子對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化。應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)分析神經(jīng)干細(xì)胞在向膽堿能神經(jīng)元誘導(dǎo)分化1w、2w和干擾Hes1基因后誘導(dǎo)分化1w、2w時(shí)Mash1基因的表達(dá)變化。 結(jié)果:Hes1、Mash1和ChATmRNA在神經(jīng)干細(xì)胞整個(gè)培養(yǎng)過程中均有表達(dá),Hes1和Mash1在誘導(dǎo)1w時(shí)各基因均較對(duì)照組表達(dá)下降,誘導(dǎo)2w時(shí)表達(dá)較誘導(dǎo)1w時(shí)增高,但低于對(duì)照組;ChAT在整個(gè)誘導(dǎo)過程中呈增高趨勢(shì)。在進(jìn)行RNAi后,Hes1基因表達(dá)降低,Mash1基因表達(dá)誘導(dǎo)1w時(shí)較對(duì)照組低,誘導(dǎo)2w時(shí)又較誘導(dǎo)1w時(shí)高,且高于對(duì)照組和單純誘導(dǎo)組。在干擾Hes1基因并誘導(dǎo)分化后ChAT基因表達(dá)量均較對(duì)照組表達(dá)高,且較單純誘導(dǎo)組也高。 結(jié)論:Hes1和Mash1參與了神經(jīng)干細(xì)胞向膽堿能神經(jīng)元的分化過程,并且發(fā)揮了重要的作用,Hes1對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞分化過程中有調(diào)控作用,與Mash1呈負(fù)調(diào)控作用。Hes1表達(dá)的減弱和Mash1表達(dá)的增加可能是神經(jīng)干細(xì)胞由增殖轉(zhuǎn)向神經(jīng)元分化的重要因素。 目的:在胚胎大鼠脊髓源性神經(jīng)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化為膽堿能神經(jīng)元過程中通過人為干擾Hes1基因的表達(dá),檢測(cè)Aldoc、Stmn1、Ywhag和Sept-9基因的表達(dá),探討神經(jīng)干細(xì)胞在誘導(dǎo)分化過程中Aldoc、Stmn1、Ywhag和Sept-9可能發(fā)揮的作用及與Hes1基因的作用關(guān)系。 方法:取體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞,接種于多聚賴氨酸包被過的6孔培養(yǎng)板中,同時(shí)加入Hes1干擾因子siRNA,然后在培養(yǎng)基中添加誘導(dǎo)因子RA、SHH、NT-3和BDNF,誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向膽堿能神經(jīng)元分化。應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)分析神經(jīng)干細(xì)胞向膽堿能神經(jīng)元誘導(dǎo)分化1w和2w時(shí)以及siRNA干擾Hes1基因并誘導(dǎo)分化1w和2w時(shí)Aldoc、Stmn1、Ywhag和Sept-9基因的表達(dá)變化。 結(jié)果:在神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為膽堿能神經(jīng)元的過程中,Aldoc基因表達(dá)量誘導(dǎo)后較對(duì)照組低;Stmn1和Ywhag基因表達(dá)量在誘導(dǎo)1w時(shí)較對(duì)照組低,誘導(dǎo)2w時(shí)較誘導(dǎo)1w時(shí)高,且高于對(duì)照組;Sept-9基因表達(dá)量在誘導(dǎo)分化后較對(duì)照組呈降低趨勢(shì),但誘導(dǎo)2w時(shí)又較誘導(dǎo)1w時(shí)高。在對(duì)Hes1基因干擾并將神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為膽堿能神經(jīng)元過程中,Aldoc基因表達(dá)量與對(duì)照組相比呈降低趨勢(shì),但誘導(dǎo)2w時(shí)其表達(dá)量高于誘導(dǎo)1w時(shí),且均高于單純誘導(dǎo)組表達(dá)量;Stmn1基因表達(dá)量在誘導(dǎo)1w和誘導(dǎo)2w時(shí)均較對(duì)照組高,且高于單純誘導(dǎo)組表達(dá)量;Ywhag基因表達(dá)量在誘導(dǎo)1w時(shí)較對(duì)照組低,誘導(dǎo)2w時(shí)又比誘導(dǎo)1w時(shí)高,且低于單純誘導(dǎo)組;Sept-9基因表達(dá)量在誘導(dǎo)1w和誘導(dǎo)2w時(shí)均較對(duì)照組低,且均低于單純誘導(dǎo)組表達(dá)量。 結(jié)論:Aldoc、Stmn1、Ywhag、Sept-9參與了神經(jīng)干細(xì)胞向膽堿能神經(jīng)元的分化過程,Aldoc和Sept-9可能對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的干性維持有一定作用;Stmn1和Ywhag可能在脊髓源神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為膽堿能神經(jīng)元的后期發(fā)揮作用;并且Aldoc和Sept-9與Hes1呈正相關(guān),Stmn1和Ywhag與Hes1呈負(fù)相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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1 朱睿,張開立,鄒向陽;RNA干擾(RNAi)技術(shù)及其在功能基因組學(xué)研究中的應(yīng)用[J];大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2003年02期

2 王晉麗;王春芳;李鵬飛;王曉霞;李靜;蔚洪恩;;TrkA在不同發(fā)育階段大鼠腦源性神經(jīng)干細(xì)胞中表達(dá)的變化[J];中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2008年03期

3 蔚洪恩;王春芳;李鵬飛;王曉霞;李靜;王晉麗;索耀君;;骨髓基質(zhì)細(xì)胞在傳代與誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞過程中hes1和mash1基因的表達(dá)變化[J];解剖學(xué)雜志;2007年05期

4 李鵬飛;王春芳;;胚胎大鼠脊髓神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)與定向分化為膽堿能神經(jīng)元的研究[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2007年06期

5 陳興書;姚忠祥;;神經(jīng)分化發(fā)育相關(guān)基因Mash-1的研究進(jìn)展[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2006年01期

6 陳剛;雷霆;牛洪泉;薛德麟;;神經(jīng)干細(xì)胞定向分化調(diào)控的研究進(jìn)展[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2005年12期

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本文編號(hào)：2342029