【摘要】：近年報(bào)道稱ⅡTDM（Ⅱ Type Diabetes mellitus，ⅡTDM）與動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）關(guān)系密切，炎癥可能是二者之間共同的病理基礎(chǔ)。已知神經(jīng)鞘磷脂（sphingomyelin，SM）是AS的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，推測(cè)神經(jīng)鞘磷脂對(duì)ⅡTDM有一定的影響。又知神經(jīng)酰胺（Ceramide，Cer）是調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、增殖的重要信號(hào)分子，SM和Cer均是鞘脂代謝的重要化合物，神經(jīng)鞘磷脂合成酶（sphingomyelin synthase，SMS）是催化底物卵磷脂（Phosphatidylcholine，PC）和Cer生成產(chǎn)物SM和甘油二酯（Diglyceride，DAG）的關(guān)鍵酶，且動(dòng)脈粥樣硬化和ⅡTDM患者均存在脂代謝紊亂。因此，本課題以SMMC-7721細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�，研究神�?jīng)鞘磷脂合成酶基因沉默后與細(xì)胞凋亡的關(guān)系，并檢測(cè)ⅡTDM患者血清中SM、磷脂轉(zhuǎn)移蛋白（phospholipid transferprotein，PLTP）及膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白（cholesterol ester transfer protein，CETP）水平，探討與ⅡTDM的關(guān)系。 目的：觀察神經(jīng)鞘磷脂合成酶基因沉默后其酶活性水平及細(xì)胞凋亡作用，探討血清SM、CETP和PLTP水平與ⅡTDM之間的關(guān)系，為ⅡTDM發(fā)生機(jī)制和臨床治療提供理論依據(jù)。 方法：以人肝癌（SMMC-7721）細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停肕TT法篩選腫瘤壞死因子（TNF-α）誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡的劑量、采用RNA干擾技術(shù)使神經(jīng)鞘磷脂合成酶基因沉默、用薄層層法檢測(cè)神經(jīng)鞘磷脂合成酶基因沉默后酶活性水平、AnnexinV-FITC/PI雙染法和Hoechst33258/PI檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況、Western blot檢測(cè)Caspase-8及Caspase-3蛋白表達(dá)的變化。根據(jù)2009年美國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)確診ⅡTDM，酶法檢測(cè)ⅡTDM患者血清SM水平與血糖值和熒光分析法測(cè)定CETP及PLTP水平。 結(jié)果：MTT顯示不同濃度的TNF-α作用對(duì)SMMC-7721細(xì)胞均有凋亡作用，凋亡率與其濃度呈正相關(guān)（劑量依賴關(guān)系），，經(jīng)篩選后本實(shí)驗(yàn)以TNF-α的濃度為200ng·μL-1誘導(dǎo)凋亡、基因沉默后神經(jīng)鞘磷脂合成酶活性水平降低、細(xì)胞凋亡率升高，與對(duì)照組相比有顯著差異、Caspase-8及Caspase-3蛋白量表達(dá)增加。ⅡTDM患者血清SM、PLTP和CETP水平高于對(duì)照組（P＜0.05）。 結(jié)論：1.神經(jīng)鞘磷脂合成酶基因沉默后其酶活性水平下降、凋亡率升高；2.血清高水平神經(jīng)鞘磷脂、磷脂轉(zhuǎn)移蛋白和膽固醇脂轉(zhuǎn)移蛋白對(duì)ⅡTDM的發(fā)生具有促進(jìn)作用。
[Abstract]:In recent years, it has been reported that 鈪

本文編號(hào)：2322560