【摘要】：研究目的：構(gòu)建髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(TREM-1)的真核表達(dá)質(zhì)粒。 實(shí)驗(yàn)方法：利用RT-PCR從人外周血總RNA中擴(kuò)增TREM-1基因的全長(zhǎng)cDNA,插入克隆載體pUCm-T,經(jīng)內(nèi)切酶BamH I和PstⅠ酶切后,將目的片段插入真核表達(dá)載體pEGFP-C3,構(gòu)建含有TREM-1的重組質(zhì)粒pEGFP-TREM-1,轉(zhuǎn)染293細(xì)胞,用熒光顯微鏡觀察熒光、Western-blot鑒定蛋白表達(dá)。將pEGFP-TREM-1重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染THP-1細(xì)胞,經(jīng)100ng/ml LPS刺激24h后,半定量RT-PCR檢測(cè)TNF-α和IL-1β基因的mRNA水平。 研究結(jié)果：經(jīng)酶切和基因測(cè)序證實(shí),克隆的基因片段為TREM-1基因；轉(zhuǎn)染了TREM-1基因表達(dá)載體的293細(xì)胞在熒光顯微鏡下可見熒光,并能表達(dá)TREM-1蛋白；重組TREM-1蛋白具有生物學(xué)活性,能增強(qiáng)細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β的mRNA表達(dá)水平。 結(jié)論：成功構(gòu)建了能夠表達(dá)TREM-1的真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-C3-TREM-1,為進(jìn)一步研究該基因的功能奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: to construct eukaryotic expression plasmid of myeloid cell trigger receptor-1 (TREM-1). Methods: the full-length cDNA, of TREM-1 gene was amplified from human peripheral blood total RNA by RT-PCR and inserted into the cloned vector pUCm-T, by endonuclease BamH I and Pst 鈪，

本文編號(hào)：2322547