【摘要】：目的對(duì)以綿羊李斯特菌(Listeriaivanovii,LI)為載體的結(jié)核疫苗候選株LI-Ag85C進(jìn)行基因減毒,初步評(píng)價(jià)其體內(nèi)外生物學(xué)特性。方法構(gòu)建含有inlB1基因上、下游同源序列的打靶質(zhì)粒,電轉(zhuǎn)原始菌LI-Ag85C感受態(tài)細(xì)胞,同源重組敲除inlB1基因;測(cè)定減毒株LIΔinlB1-Ag85C和原始株LI-Ag85C的體外生長(zhǎng)曲線;測(cè)定兩株菌對(duì)于肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞的黏附、侵襲能力的影響,比較兩株菌溶血能力的差異,兩株菌對(duì)于小鼠的半數(shù)致死量(median lethal dose,LD_(50))差異。結(jié)果敲除inlB1基因的重組結(jié)核疫苗候選株LIΔinlB1-Ag85C的基因序列符合預(yù)期結(jié)果。減毒株與原始株的體外生長(zhǎng)情況基本一致;對(duì)于HepG2細(xì)胞的黏附率分別為6.66%和7.46%,侵襲率分別為0.031%和0.042%,減毒株的黏附、侵襲能力均低于原始株,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;減毒株的溶血活性較原始株無(wú)明顯變化;對(duì)小鼠的LD_(50)值分別為3.2×10~(8 )CFU/只和6.7×10~(7 )CFU/只,減毒株LD_(50)相較于原始株明顯提高。結(jié)論成功構(gòu)建inlB1基因缺失的新型結(jié)核疫苗候選株LIΔinlB1-Ag85C,其毒力較原始株降低。
[Abstract]:Objective to study the gene reduction of TB vaccine candidate strain LI-Ag85C using Listeria ovis (Listeriaivanovii,LI) as vector and to evaluate its biological characteristics in vitro and in vivo. Methods the target plasmids containing the upstream and downstream homologous sequences of inlB1 gene were constructed, the LI-Ag85C receptive cells of the original strain were electrotransferred, the homologous recombination knocked out the inlB1 gene, and the growth curves of the attenuated strain LI 螖 inlB1-Ag85C and the original strain LI-Ag85C were measured in vitro. The effects of the two strains on the adhesion and invasion of hepatoma cell line HepG2 were determined, and the hemolytic ability of the two strains was compared. The (median lethal dose,LD_ (50) of the two strains to mice was different. Results the gene sequence of recombinant TB vaccine candidate strain LI 螖 inlB1-Ag85C with knockout of inlB1 gene was in line with the expected results. The growth in vitro of attenuated strain and original strain was basically the same. The adhesion rates of HepG2 cells were 6.66% and 7.46%, and the invasion rates were 0.031% and 0.042%, respectively. The adhesion and invasion ability of the attenuated strains were lower than those of the original strains, but the difference was not statistically significant. The LD_ (50) value of attenuated strain was 3.2 脳 10 ~ (8) CFU/ only and 6.7 脳 10 ~ (7) CFU/, respectively, and the LD_ (50) value of attenuated strain LD_ (50) was significantly higher than that of original strain. Conclusion the virulence of novel TB vaccine candidate strain LI 螖 inlB1-Ag85C, with inlB1 gene deletion is lower than that of original strain.
【作者單位】： 四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院衛(wèi)生檢驗(yàn)與檢疫系;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(No.31570924) 四川省科技廳國(guó)際合作項(xiàng)目(No.2017HH0080)資助
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2320899