【摘要】：奧卡西平(Oxcarbazepine, OXC)作為一種新型抗癲癇藥物,主要用于癲癇部分性發(fā)作、全身痙攣發(fā)作的單獨(dú)治療和難治型癲癇的聯(lián)合治療。具有口服吸收快速、生物利用度高、副作用小等優(yōu)點(diǎn),在臨床上應(yīng)用越來越廣泛。其可能作用機(jī)制為：①抑制電壓門控型鈉離子通道的開放,減少鈉離子內(nèi)流,抑制神經(jīng)元的重復(fù)放電和細(xì)胞內(nèi)cAMP的生成,降低神經(jīng)興奮性,減少突觸沖動(dòng)傳播,增加細(xì)胞穩(wěn)定性；②通過調(diào)節(jié)高電壓激活型鈣離子通道,減少興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸的釋放進(jìn)而減少癲癇發(fā)作的產(chǎn)生。Saber等通過對(duì)新發(fā)的癲癇患者給予奧卡西平或者其他抗癲癇藥物的研究,4個(gè)月后進(jìn)行評(píng)估,發(fā)現(xiàn)奧卡西平在智力、注意力、學(xué)習(xí)記憶、語言視覺等方面均無明顯損害作用,且奧卡西平和卡馬西平合用在學(xué)習(xí)記憶方面還有明顯改善作用。另有學(xué)者通過應(yīng)用雙盲對(duì)照研究方法觀察奧卡西平對(duì)癲癇患者的記憶力、注意力等方面的影響,結(jié)果顯示其對(duì)認(rèn)知功能也無明顯損害作用。為了進(jìn)一步了解奧卡西平對(duì)認(rèn)知功能的作用,采用戊四氮致癇大鼠模型,通過水迷宮實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)大鼠認(rèn)知功能的變化。 癲癇持續(xù)發(fā)作可造成神經(jīng)細(xì)胞功能損傷,越來越多的研究表明在癲癇發(fā)作致腦損傷中,細(xì)胞凋亡(apoptosis)具有重要作用。細(xì)胞凋亡即程序性細(xì)胞死亡,是在相關(guān)基因控制下自發(fā)的一種細(xì)胞死亡過程。其中Caspase蛋白是細(xì)胞凋亡的執(zhí)行者,其核心酶Caspase-3的出現(xiàn)作為細(xì)胞凋亡的標(biāo)志。作為一種性質(zhì)及其活潑的NO由一氧化氮合酶(NOS)催化生成,存在時(shí)間較短,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中起到復(fù)雜而重要的作用。有學(xué)者認(rèn)為癲癇發(fā)作后腦損傷產(chǎn)生的NOS為不依賴鈣的誘導(dǎo)型一氧化氮合酶,其可產(chǎn)生過量的NO引起神經(jīng)細(xì)胞凋亡。 本課題通過建立大鼠癲癇模型,并給予奧卡西平干預(yù),然后應(yīng)用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試各組大鼠學(xué)習(xí)及記憶能力,應(yīng)用免疫組化技術(shù)觀察癲癇發(fā)作后不同時(shí)間誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)及Caspase-3的表達(dá)變化,通過將動(dòng)物行為學(xué)測(cè)試和組織切片病理學(xué)檢查相結(jié)合的方法來探討奧卡西平對(duì)癲癇大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用,為臨床預(yù)防癲癇發(fā)作所致的神經(jīng)細(xì)胞功能損害提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 目的： 探討奧卡西平(OXC)對(duì)戊四氮(PTZ)致癇大鼠認(rèn)知功能的保護(hù)作用及對(duì)神經(jīng)元誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)和Caspase-3的表達(dá)及相互關(guān)系。 方法： 健康雄性Wistar大鼠52只隨機(jī)分成4組：A組生理鹽水組(NS)組,B組癲癇(epilepsy, EP)+NS組,C組EP+OXC組,D組OXC組.B組、C組連續(xù)5d腹腔注射PTZ60mg/kg,根據(jù)Racine分級(jí)方法以連續(xù)5d出現(xiàn)Ⅳ-Ⅴ級(jí)癲癇發(fā)作,且發(fā)作連續(xù)時(shí)間大于3-5min為癲癇模型制備成功。從第6天開始,A組、B組予NS灌胃,C組、D組給予OXC灌胃。每組隨機(jī)取8只大鼠為免疫組化亞組,分別于喂藥滿6h、3d、7d、12d處死動(dòng)物取腦,腦組織行免疫組化觀察各組大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞iNOS及Caspase-3的表達(dá)變化；余為水迷宮亞組,于喂藥后第3-6d 9-12d行水迷宮實(shí)驗(yàn),觀察比較大鼠空間認(rèn)知及學(xué)習(xí)記憶情況。 結(jié)果： 1.實(shí)驗(yàn)組大鼠給予戊四氮腹腔注射均出現(xiàn)抽搐,成功率100%,其中死亡5只,死亡率9.6%。 2. Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) PNT: 第一時(shí)間段試驗(yàn)(喂藥3-5d)：EP+NS組與NS組相比較,逃避潛伏期時(shí)間延長(zhǎng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；EP+OXC組在用藥第3d與NS組相比較,逃避潛伏期時(shí)間延長(zhǎng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；EP+OXC組在用藥第5d與NS組相比較,逃避潛伏期時(shí)間縮短,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；EP+OXC組在用藥第4d和第5d與EP+NS組相比較,逃避潛伏期時(shí)間縮短,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05) 第二時(shí)間段試驗(yàn)(喂藥第9-11d):EP+NS組與NS組相比較,逃避潛伏期時(shí)間延長(zhǎng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；EP+OXC組在用藥第9d和第10d與NS組相比較,逃避潛伏期時(shí)間延長(zhǎng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且與EP+NS組比較,逃避潛伏期時(shí)間縮短,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)； SPT：大鼠跨越平臺(tái)象限次數(shù)的結(jié)果：與NS組比較,EP+NS組大鼠跨越平臺(tái)次數(shù)明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；EP+OXC組與EP+NS組比較,跨越平臺(tái)次數(shù)無明顯差異,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05) 3.免疫組織化學(xué)染色 iNOS免疫反應(yīng)產(chǎn)物呈棕褐色,主要分布于神經(jīng)元細(xì)胞漿內(nèi)。Caspase-3主要分布于神經(jīng)元胞漿內(nèi),呈棕黃色。EP+NS組iNOS陽性表達(dá)產(chǎn)物較其他組明顯增多,6h、3d、7d組顯著增多,其中以6h最為顯著；EP+NS組Caspase-3陽性表達(dá)產(chǎn)物增多,6h、3d、7d組顯著增多,其中以7d組最為顯著。 4.免疫組化陽性產(chǎn)物平均光密度 與NS組比較,OXC組iNOS和caspase-3的平均光密度差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05), EP+NS組caspase-3的平均光密度差異顯著(P0.01),EP+NS組iNOS平均光密度6h、3d、7d差異顯著(P0.01)。與EP+NS組相比,EP+OXC組caspase-3的平均光密度(7d、12d)差異顯著(P0.01),EP+OXC組iNOS的平均光密度(3d、7d、12d)差異顯著(P0.01) 結(jié)論： 奧卡西平有明確抗癲癇作用且對(duì)認(rèn)知功能有一定保護(hù)作用,其可能機(jī)制通過降低神經(jīng)細(xì)胞iNOS和Caspase-3的表達(dá)而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用；奧卡西平不影響正常大鼠的認(rèn)知功能。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R742.1;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2309975