發(fā)布時間：2018-11-04 12:23

【摘要】：研究背景： 結(jié)核病是一種由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)引起的疾病,它流行于世界各國家與地區(qū),在經(jīng)濟欠發(fā)達地區(qū)情況尤甚。由于結(jié)核病病程長、患者依從性差,加上抗結(jié)核藥物的不當(dāng)使用,使MTB出現(xiàn)了耐藥性問題并逐漸加劇,導(dǎo)致結(jié)核病近年來又重新成為受到廣泛關(guān)注的公共衛(wèi)生問題。傳統(tǒng)的診斷方法如痰涂片、藥敏試驗的檢出率低,周期長,因此快速檢測與診斷耐藥結(jié)核就成為了結(jié)核病防治的重要攻關(guān)方向。研究證實MTB耐藥的主要原因是菌株的基因變異,耐利福平(Rifampicin, RFP)突變主要位于rpoB基因中的81bp片段,耐異煙肼(Isoniazid, INH)突變主要位于katG315、inhA啟動子、ahpC啟動子、inhA94等位點。高分辨熔解曲線分析(High-resolution melting,HRM)是近年出現(xiàn)的一種應(yīng)用于單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism, SNP)分析的技術(shù),是一種操作簡便、快速、低成本、結(jié)果準確,并實現(xiàn)了真正的閉管操作的檢測方法。在本研究中,我們將HRM應(yīng)用于MTB的耐藥相關(guān)基因katG、inhA、ahpC、rpoB的檢測。目的： 通過HRM與基因測序分別檢測MTB耐藥基因katG、inhA、ahpC啟動子區(qū)域和rpoB81bp核心區(qū)域的結(jié)果對比研究,探討HRM快速檢測耐藥結(jié)核分枝桿菌的異煙肼與利福平耐藥突變位點的可行性。方法： 1.使用改良羅氏中性培養(yǎng)基轉(zhuǎn)種菌株,對所培養(yǎng)的菌株進行INH與RFP的藥物敏感性測定。 2.將所有312株菌株進行katG、inhA、ahpC、rpoB基因目的片段的測序,運用blastn進行序列比對和分析。 3.通過建立HRM方法,檢測140株RFP耐藥株rpoB中的81bp片段、150株INH耐藥株katG315位、inhA啟動子區(qū)、inhA94位、ahpC啟動子區(qū)與rpoB8lbp核心區(qū)域,并與基因測序結(jié)果相比較,驗證HRM在耐藥結(jié)核分枝桿菌快速檢測中的可行性。 結(jié)果： 1.RFP與INH基因測序的突變率分別為95.7%(134/140)、92%(138/150)。HRM檢測RFP與INH的突變率分別為95.7%(134/140),88.1%(133/150)�；驕y序與HRM檢測結(jié)果差別無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。 2.140例RFP耐藥株HRM檢測與基因測序的陽性符合率為97.8%(131/134),150株INH耐藥株中HRM檢測與基因測序的陽性符合率為96.4%(133/138) 3.HRM方法檢測RFP的特異度為98.0%(150/153),靈敏度為93.6%(134/140),INH檢測的特異度為98.7%(151/153),靈敏度為88.1%(133/150)。 結(jié)論： 1.與基因測序相比,HRM檢測在應(yīng)用于耐藥MTB的快速檢測時有同樣的陽性檢出能力,但更加簡便、快速。 2.與基因測序相比,HRM擁有良好的陽性符合率,但只能用于檢測已知的突變位點。 3.HRM在用于檢測RFP與INH耐藥MTB時有著良好的靈敏度和特異度。
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【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R378

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號：2309806