發(fā)布時間：2018-11-02 17:10

【摘要】：目的建立一種基于吲哚胺2,3-雙加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)的活性快速評價人間充質(zhì)干細(xì)胞(human mesenchymal stem cells,h MSCs)免疫調(diào)控功能的吸光光度法,并進(jìn)行優(yōu)化。方法以含干擾素γ(interferonγ,IFNγ)的完全培養(yǎng)基激活hMSCs,收集hMSCs培養(yǎng)上清,與三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)和對二甲氨基苯甲醛(paradimethylaminobenzaldehyde,PDAB)反應(yīng),檢測A492值,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中色氨酸代謝產(chǎn)物犬尿氨酸(kynurenine)的含量,以反映h MSCs所分泌IDO1的酶代謝活性,并對方法中的培養(yǎng)體系(6、12、24、48、96孔板)、IFNγ處理時間(4、8、12、24 h)、培養(yǎng)基使用量(150、200、250、300、350、400、450及500μl)及IFNγ作用濃度(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、5.0及10.0 ng/ml)進(jìn)行優(yōu)化。同時驗證方法的特異性,并檢測樣品保存條件及液氮凍存后不同復(fù)蘇時間對kynurenine濃度的影響。采用優(yōu)化后的方法分析不同來源、不同代次的hMSCs分泌IDO1的能力。結(jié)果確定最佳檢測條件為:培養(yǎng)體系為48孔體系,IFNγ處理時間為24 h,培養(yǎng)基使用體積為200μl,IFNγ作用濃度為10.0 ng/ml。該方法可特異性檢測IDO1的活性;除常溫外,其他樣品保存條件對檢測結(jié)果影響較小;液氮凍存后復(fù)蘇24 h可檢測到與凍存前水平相當(dāng)?shù)膋ynurenine。該方法可有效判斷不同供體來源的hMSCs在分泌IDO1功能上的差異。結(jié)論該方法可快速、特異、穩(wěn)定地檢測hMSCs分泌IDO1的水平,且操作簡便,可用于快速評價h MSCs的免疫調(diào)控功能。
[Abstract]:Objective to establish and optimize an absorbance method for rapid evaluation of the immunomodulatory function of human mesenchymal stem cells (human mesenchymal stem cells,h MSCs) based on the activity of indoleamine 2n 3 dioxygenase 1 (IDO 1). Methods the supernatants of hMSCs were collected from interferon 緯 (IFN 緯) activated hMSCs, medium and reacted with trichloroacetic acid (trichloroacetic acid,TCA) and p-dimethylaminobenzaldehyde (paradimethylaminobenzaldehyde,PDAB). The content of canine uric acid (kynurenine), a tryptophan metabolite, was calculated by standard curve to reflect the enzyme metabolic activity of IDO1 secreted by h MSCs, and the incubation time of), IFN 緯 in the culture system of the method (612121248896 well plate) was studied. The amount of culture medium (150200250300350400450 and 500 渭 l) and the concentration of IFN 緯 (0.20.40.60.81.0,5.0 and 10.0 ng/ml) were optimized. At the same time, the specificity of the method was verified, and the effects of preservation conditions and different resuscitation time of liquid nitrogen on the concentration of kynurenine were examined. The optimized method was used to analyze the ability of hMSCs to secrete IDO1 from different sources and generations. The results showed that the optimal detection conditions were as follows: the culture system was 48 well, the treatment time of IFN 緯 was 24 h, the volume of culture medium was 200 渭 l / L IFN- 緯 and the concentration of IFN- 緯 was 10.0 ng/ml.. This method can specifically detect the activity of IDO1, and the preservation conditions of other samples have little effect on the test results except at room temperature. The kynurenine. which is comparable to the pre-freezing level can be detected after 24 hours of recovery after cryopreservation with liquid nitrogen. This method can effectively judge the difference of IDO1 secretion function of hMSCs from different donor sources. Conclusion this method can be used to detect the level of IDO1 secreted by hMSCs quickly, specifically and stably. It is easy to operate and can be used to evaluate the immune regulation function of h MSCs.
【作者單位】： 中國食品藥品檢定研究院生物制品檢定所細(xì)胞保藏及研究中心衛(wèi)生部生物技術(shù)產(chǎn)品檢定方法及其標(biāo)準(zhǔn)化重點(diǎn)實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項目(81172102) 中國科學(xué)院干細(xì)胞與再生醫(yī)學(xué)研究戰(zhàn)略性先導(dǎo)科技專項(XDA01030508) 國家重點(diǎn)研發(fā)計劃(2016YFA0101501)
【分類號】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊玉嘉;張凱;白雪;王毅;;甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白對人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂肪分化的影響[J];天津藥學(xué);2012年06期

2 華杰;龔健;宋振順;;影響人間充質(zhì)干細(xì)胞數(shù)量的因素[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年36期

3 林競韌,郭坤元,李江琪;人間充質(zhì)干細(xì)胞對裸鼠體內(nèi)造血重建影響的實驗研究[J];中華血液學(xué)雜志;2004年12期

4 董群偉;孫奮勇;王華;洪曼杰;胡伶平;;牛膝含藥血清對體外培養(yǎng)人間充質(zhì)干細(xì)胞增殖與分化的影響[J];廣東藥學(xué)院學(xué)報;2006年02期

5 朱六龍,孔榮,孫自敏,尚希福,童元,方詩元,汪健,翟志敏,吳競生;成人間充質(zhì)干細(xì)胞體外成骨的初步研究[J];臨床骨科雜志;2001年02期

6 常靜;雷寒;陳建斌;賈鋒鵬;;人間充質(zhì)干細(xì)胞免疫學(xué)性質(zhì)的對比研究[J];臨床心血管病雜志;2007年10期

7 段小軍,楊柳,顧祖超,李起鴻;人間充質(zhì)干細(xì)胞在骨組織工程中的應(yīng)用[J];中華創(chuàng)傷骨科雜志;2004年03期

8 胡鳶;段小軍;楊柳;;缺氧誘導(dǎo)因子-1α基因轉(zhuǎn)染人間充質(zhì)干細(xì)胞的體內(nèi)促血管生成作用[J];中華實驗外科雜志;2006年08期

9 王燕萍;;模擬微重力對成骨誘導(dǎo)的人間充質(zhì)干細(xì)胞的作用:一項生物信息學(xué)研究(英)[J];口腔生物醫(yī)學(xué);2012年01期

10 李秋晨;肖苒;;人間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記分子的研究進(jìn)展[J];組織工程與重建外科雜志;2013年04期

相關(guān)會議論文 前1條

1 張凱;黃津;白雪;陸金紅;王毅;;甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白對人間充質(zhì)干細(xì)胞成骨和成脂分化的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國中青年檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 張翼澾;人間充質(zhì)干細(xì)胞Stro-1～+和Stro-1～-亞群不同的免疫抑制作用[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2004年

2 高磊;人間充質(zhì)干細(xì)胞對動員后外周血單個核細(xì)胞免疫反應(yīng)的影響及在人—鼠嵌合體中的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前6條

1 劉曉丹;不同造血發(fā)育階段的人間充質(zhì)干細(xì)胞研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2007年

2 王雋;戊二醛交聯(lián)的Ⅱ型膠原支架對人間充質(zhì)干細(xì)胞髓核樣分化的生物學(xué)特性研究[D];浙江大學(xué);2015年

3 胡鳶;缺氧誘導(dǎo)因子-1a基因轉(zhuǎn)染人間充質(zhì)干細(xì)胞的體內(nèi)促血管生成作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

4 馬嵐;人間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)過程中表面標(biāo)記的變化[D];鄭州大學(xué);2005年

5 鄒穎;硒對人間充質(zhì)干細(xì)胞和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮信號的調(diào)節(jié)作用[D];暨南大學(xué);2011年

6 馮學(xué)永;人間充質(zhì)干細(xì)胞體外分化為神經(jīng)樣細(xì)胞的研究[D];汕頭大學(xué);2005年

，

本文編號：2306421