【摘要】：目的：分離并培養(yǎng)出人主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞,證實(shí)其表達(dá)�；撬徂D(zhuǎn)運(yùn)體并未被其他種類細(xì)胞所污染,進(jìn)而為實(shí)驗(yàn)提供干預(yù)對(duì)象。 方法：收集A型主動(dòng)脈夾層患者的主動(dòng)脈瓣葉(病檢排除微小的病變),用酶解法降解細(xì)胞外基質(zhì),分離出瓣膜間質(zhì)細(xì)胞。免疫組化鑒定細(xì)胞的表型：�；撬徂D(zhuǎn)運(yùn)體,平滑肌α肌動(dòng)蛋白,波形蛋白,CD31,平滑肌肌球蛋白和結(jié)蛋白。 結(jié)果：分離出的主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞能夠增殖,并表達(dá)�；撬徂D(zhuǎn)運(yùn)體,平滑肌α肌動(dòng)蛋白和波形蛋白,但不表達(dá)CD31,平滑肌肌球蛋白和結(jié)蛋白。 結(jié)論：酶解法分離的人主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞能夠在體外條件下增殖,并表達(dá)特有的表型,且未被內(nèi)皮細(xì)胞和肌細(xì)胞所污染。 目的：通過藥物干預(yù)建立主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的細(xì)胞模型。 方法：對(duì)細(xì)胞使用鈣化培養(yǎng)基(含p甘油磷酸鈉,地塞米松和維生素C)促進(jìn)主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化。通過堿性磷酸酶活性檢測(cè)、染色和鈣化結(jié)節(jié)染色(von Kossa法)以及western blot檢測(cè)堿性磷酸酶及Cbfα1的表達(dá)評(píng)估該模型的效果。 結(jié)果：在藥物干預(yù)后的第21天,模型組較對(duì)照組的堿性磷酸酶活性、染色和鈣化結(jié)節(jié)染色更明顯,且表達(dá)更多的ALP和Cbfα1。 結(jié)論：鈣化培養(yǎng)基能夠明顯地促進(jìn)主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化,表達(dá)堿性磷酸酶和Cbfα1并形成鈣化結(jié)節(jié)。 目的：證實(shí)�；撬崮軌蛞种浦鲃�(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化,并討論牛磺酸轉(zhuǎn)運(yùn)體和ERK通路在其中扮演的角色。 方法：在鈣化培養(yǎng)基中分別添加不同濃度的牛磺酸(1mM,3mM,5mM,10mM,20mM),或�；撬�(10mM)+ERK通路阻滯劑PD98059干預(yù)24小時(shí)后檢測(cè)核結(jié)合因子α-1的表達(dá)水平,在干預(yù)的第14天和第21天分別檢測(cè)堿性磷酸酶的活性和表達(dá)水平。干預(yù)的第21天檢測(cè)鈣化結(jié)節(jié)和鈣含量,并檢測(cè)表型蛋白的變化。在培養(yǎng)基中添加�；撬�(10mM)后,在不同時(shí)間(5min,10min,30min,60min,120min)檢測(cè)ERK通路的激活情況。在培養(yǎng)基中同時(shí)添加�；撬�(10mM)和�；撬徂D(zhuǎn)運(yùn)體阻滯劑p丙氨酸/PD98059,干預(yù)20分鐘后檢測(cè)ERK通路的激活程度。 結(jié)果：牛磺酸以濃度依賴性抑制細(xì)胞產(chǎn)生核結(jié)合因子α-1和堿性磷酸酶(10mM濃度時(shí)作用最明顯),PD98059能夠明顯抑制�；撬岬纳鲜鲎饔谩Ｅ；撬�(10mM)可明顯減少鈣化結(jié)節(jié)的產(chǎn)生。�；撬崮軌蚣せ頔RK通路,且p丙氨酸和PD98059能夠抑制牛磺酸對(duì)該通路的激活。 結(jié)論：牛磺酸通過�；撬徂D(zhuǎn)運(yùn)體和ERK通路以濃度依賴性抑制主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化。
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【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

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本文編號(hào)：2306192