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SAMHD1對(duì)HBV DNA形成的抑制作用及其機(jī)制研究

發(fā)布時(shí)間:2018-10-26 18:17
【摘要】:目的:研究不同肝細(xì)胞SAMHD1表達(dá)水平及其對(duì)HBV DNA形成的抑制作用和相關(guān)機(jī)制。方法:通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot法檢測Jurkat、THP-1、Hep G2、Hep G2.2.15和Huh7細(xì)胞等細(xì)胞SAMHD1 mRNA和蛋白表達(dá)水平;通過對(duì)Hep G2.2.15細(xì)胞轉(zhuǎn)染過表達(dá)質(zhì)粒和shRNA,升高或者降低SAMHD1的表達(dá)水平,觀察不同SAMHD1表達(dá)水平對(duì)HBV DNA水平的影響;補(bǔ)充不同濃度的d NTP,比較不同d NTP濃度對(duì)HBV DNA水平的影響。結(jié)果:肝癌細(xì)胞系有較高的SAMHD1表達(dá)水平;降低SAMHD1可以使HBV DNA水平升高2.3~2.8倍,升高SAMHD1可以使HBV DNA降低至33%左右(P0.01);升高d NTP濃度可以促進(jìn)HBV DNA的合成水平,抵消SAMHD1的抑制作用。結(jié)論:SAMHD1可以抑制肝癌細(xì)胞內(nèi)HBV DNA的生成,可能是通過降低細(xì)胞內(nèi)d NTP濃度實(shí)現(xiàn)的。
[Abstract]:Aim: to study the expression of SAMHD1 in different hepatocytes and its inhibitory effect on the formation of HBV DNA and its related mechanisms. Methods: the expression of SAMHD1 mRNA and protein in Jurkat,THP-1,Hep G2Hep G2.2.15 and Huh7 cells were detected by real-time quantitative PCR and Western blot. The effect of different SAMHD1 expression levels on the expression of HBV DNA was observed by transfection of SAMHD1 plasmid and shRNA, into Hep G2.2.15 cells. The effects of different d NTP concentrations on HBV DNA levels were compared by adding d NTP, at different concentrations. Results: the expression of SAMHD1 in HCC cell line was higher than that in HCC cell line, the HBV DNA level increased 2.32.8-fold by decreasing SAMHD1, and HBV DNA decreased to about 33% by increasing SAMHD1 (P0.01). Increasing d NTP concentration could promote the synthesis of HBV DNA and counteract the inhibition of SAMHD1. Conclusion: SAMHD1 can inhibit the production of HBV DNA in hepatoma cells, which may be achieved by decreasing the concentration of d NTP.
【作者單位】: 浙江大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)研究所;
【分類號(hào)】:R392

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本文編號(hào):2296564

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