【摘要】：目的通過優(yōu)化電穿孔轉(zhuǎn)染條件,探討影響人原代成纖維細(xì)胞電轉(zhuǎn)染效率和轉(zhuǎn)染后細(xì)胞存活率的因素,篩選出人原代成纖維細(xì)胞的最佳電轉(zhuǎn)染條件。方法通過改變脈沖電壓、脈沖次數(shù)和質(zhì)粒濃度等條件,將含有增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)基因的質(zhì)粒pEGFP-N1電穿孔轉(zhuǎn)染入人原代成纖維細(xì)胞。利用錐蟲藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞存活情況,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染24h后的轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果在低電壓模式下,脈沖電壓320V、質(zhì)粒濃度為20μg/mL、脈沖1次時(shí),人原代成纖維細(xì)胞的電轉(zhuǎn)染效果最理想,轉(zhuǎn)染效率達(dá)到(42.53±0.63)%,細(xì)胞存活率為(74.30±3.01)%。結(jié)論優(yōu)化了人原代成纖維細(xì)胞的電轉(zhuǎn)染條件,在保證細(xì)胞較高存活率的前提下提高了人原代成纖維細(xì)胞的電轉(zhuǎn)染效率,為后續(xù)基因功能的研究打下基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to optimize the electroporation transfection conditions and to investigate the factors affecting the electrotransfection efficiency and survival rate of human primary fibroblasts, and to select the best electrotransfection conditions for human primary fibroblasts. Methods the plasmid pEGFP-N1 containing the enhanced green fluorescent protein (EGFP) gene was transfected into human primary fibroblasts by changing the pulse voltage, pulse number and plasmid concentration. Results under the low voltage mode, the transfection efficiency of the primary fibroblasts was (42.53 鹵0.63)% when the pulse voltage was 320V, the plasmid concentration was 20 渭 g / mL, and the electrotransfection efficiency was (42.53 鹵0.63)%. Conclusion the electrotransfection conditions of human primary fibroblasts were optimized, and the electrotransfection efficiency of human primary fibroblasts was improved on the premise of high survival rate, which laid a foundation for the further study of gene function.
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院實(shí)驗(yàn)診斷科;解放軍東部戰(zhàn)區(qū)73901部隊(duì);第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)中心;第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院燒傷科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81172472) 中國(guó)博士后科學(xué)基金(2016M593004) 東方學(xué)者跟蹤支持計(jì)劃(GZ2015009)~~
【分類號(hào)】：R329.2

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本文編號(hào)：2296725