【摘要】：目的通過優(yōu)化電穿孔轉(zhuǎn)染條件,探討影響人原代成纖維細胞電轉(zhuǎn)染效率和轉(zhuǎn)染后細胞存活率的因素,篩選出人原代成纖維細胞的最佳電轉(zhuǎn)染條件。方法通過改變脈沖電壓、脈沖次數(shù)和質(zhì)粒濃度等條件,將含有增強型綠色熒光蛋白(EGFP)基因的質(zhì)粒pEGFP-N1電穿孔轉(zhuǎn)染入人原代成纖維細胞。利用錐蟲藍染色檢測細胞存活情況,采用流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染24h后的轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果在低電壓模式下,脈沖電壓320V、質(zhì)粒濃度為20μg/mL、脈沖1次時,人原代成纖維細胞的電轉(zhuǎn)染效果最理想,轉(zhuǎn)染效率達到(42.53±0.63)%,細胞存活率為(74.30±3.01)%。結(jié)論優(yōu)化了人原代成纖維細胞的電轉(zhuǎn)染條件,在保證細胞較高存活率的前提下提高了人原代成纖維細胞的電轉(zhuǎn)染效率,為后續(xù)基因功能的研究打下基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to optimize the electroporation transfection conditions and to investigate the factors affecting the electrotransfection efficiency and survival rate of human primary fibroblasts, and to select the best electrotransfection conditions for human primary fibroblasts. Methods the plasmid pEGFP-N1 containing the enhanced green fluorescent protein (EGFP) gene was transfected into human primary fibroblasts by changing the pulse voltage, pulse number and plasmid concentration. Results under the low voltage mode, the transfection efficiency of the primary fibroblasts was (42.53 鹵0.63)% when the pulse voltage was 320V, the plasmid concentration was 20 渭 g / mL, and the electrotransfection efficiency was (42.53 鹵0.63)%. Conclusion the electrotransfection conditions of human primary fibroblasts were optimized, and the electrotransfection efficiency of human primary fibroblasts was improved on the premise of high survival rate, which laid a foundation for the further study of gene function.
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院實驗診斷科;解放軍東部戰(zhàn)區(qū)73901部隊;第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院臨床實驗中心;第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院燒傷科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81172472) 中國博士后科學(xué)基金(2016M593004) 東方學(xué)者跟蹤支持計劃(GZ2015009)~~
【分類號】：R329.2

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本文編號：2296725