【摘要】：為了研究沉默F(xiàn)NBP1(formin-binding protem1)基因對細胞體外增殖以及對細胞遷移能力的影響,設計并構建了3個靶向FNBP1 siRNA干擾載體(Si-1,Si-2,Si-3),經酶切和DNA測序鑒定后轉染人正常的肝細胞HL-7702。RT-PCR和Western blot檢測瞬時轉染細胞中FNBP1基因的干擾效率,篩選出特異高效的RNAi靶點。并用G418篩選穩(wěn)定表達了RNAi的細胞株,用XTT法檢測細胞體外增殖率,劃痕法檢測細胞的遷移能力。結果顯示:酶切和測序結果證明干擾質粒構建正確;轉染特異性的干擾質粒(Si-1、Si-2、Si-3)細胞的FNBP1基因表達量與對照組相比均有所降低,在蛋白質水平表達也明顯受到抑制,且重組干擾質粒Si-2的干擾效應較強。XTT檢測結果表明,構建的沉默F(xiàn)NBP1重組質粒Si-2能顯著抑制HL-7702細胞的體外增殖能力,但并不直接影響HL-7702細胞的遷移能力。
[Abstract]:In order to study the effect of silencing FNBP1 (formin-binding protem1) gene on cell proliferation and cell migration in vitro, three FNBP1 siRNA interference vectors (Si-1,Si-2,Si-3) were designed and constructed. After restriction endonuclease digestion and DNA sequencing, HL-7702.RT-PCR and Western blot were used to detect the interference efficiency of FNBP1 gene in the transient transfection cells, and specific and efficient RNAi targets were screened out. The cell lines expressing RNAi stably were screened by G418. The proliferation rate of cells in vitro was detected by XTT method and the migration ability of cells was detected by scratch method. The results showed that the construction of interfering plasmid was correct by restriction endonuclease digestion and sequencing. Compared with the control group, the expression of FNBP1 gene in the transfected interfering plasmid (Si-1,Si-2,Si-3) cells was decreased, and the expression of FNBP1 gene was also inhibited at the protein level. The results of XTT analysis showed that the silencing FNBP1 recombinant plasmid Si-2 could significantly inhibit the proliferation of HL-7702 cells in vitro, but had no direct effect on the migration ability of HL-7702 cells.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學分子醫(yī)學及腫瘤學研究中心細胞生物學及遺傳學教研室;
【基金】：國家自然科學基金項目(20803098) 重慶市教育委員會科學技術研究項目(KJ080301)
【分類號】：R346

【參考文獻】

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本文編號：2295726