【摘要】：為了研究沉默F(xiàn)NBP1(formin-binding protem1)基因?qū)?xì)胞體外增殖以及對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響,設(shè)計(jì)并構(gòu)建了3個(gè)靶向FNBP1 siRNA干擾載體(Si-1,Si-2,Si-3),經(jīng)酶切和DNA測(cè)序鑒定后轉(zhuǎn)染人正常的肝細(xì)胞HL-7702。RT-PCR和Western blot檢測(cè)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中FNBP1基因的干擾效率,篩選出特異高效的RNAi靶點(diǎn)。并用G418篩選穩(wěn)定表達(dá)了RNAi的細(xì)胞株,用XTT法檢測(cè)細(xì)胞體外增殖率,劃痕法檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力。結(jié)果顯示:酶切和測(cè)序結(jié)果證明干擾質(zhì)粒構(gòu)建正確;轉(zhuǎn)染特異性的干擾質(zhì)粒(Si-1、Si-2、Si-3)細(xì)胞的FNBP1基因表達(dá)量與對(duì)照組相比均有所降低,在蛋白質(zhì)水平表達(dá)也明顯受到抑制,且重組干擾質(zhì)粒Si-2的干擾效應(yīng)較強(qiáng)。XTT檢測(cè)結(jié)果表明,構(gòu)建的沉默F(xiàn)NBP1重組質(zhì)粒Si-2能顯著抑制HL-7702細(xì)胞的體外增殖能力,但并不直接影響HL-7702細(xì)胞的遷移能力。
[Abstract]:In order to study the effect of silencing FNBP1 (formin-binding protem1) gene on cell proliferation and cell migration in vitro, three FNBP1 siRNA interference vectors (Si-1,Si-2,Si-3) were designed and constructed. After restriction endonuclease digestion and DNA sequencing, HL-7702.RT-PCR and Western blot were used to detect the interference efficiency of FNBP1 gene in the transient transfection cells, and specific and efficient RNAi targets were screened out. The cell lines expressing RNAi stably were screened by G418. The proliferation rate of cells in vitro was detected by XTT method and the migration ability of cells was detected by scratch method. The results showed that the construction of interfering plasmid was correct by restriction endonuclease digestion and sequencing. Compared with the control group, the expression of FNBP1 gene in the transfected interfering plasmid (Si-1,Si-2,Si-3) cells was decreased, and the expression of FNBP1 gene was also inhibited at the protein level. The results of XTT analysis showed that the silencing FNBP1 recombinant plasmid Si-2 could significantly inhibit the proliferation of HL-7702 cells in vitro, but had no direct effect on the migration ability of HL-7702 cells.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)分子醫(yī)學(xué)及腫瘤學(xué)研究中心細(xì)胞生物學(xué)及遺傳學(xué)教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(20803098) 重慶市教育委員會(huì)科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(KJ080301)
【分類號(hào)】：R346

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2295726