【摘要】：背景：全反式維甲酸（atRA）是維生素A的活性代謝產(chǎn)物，通過與受體結(jié)合來發(fā)揮其在胚胎發(fā)育和器官形成、組織內(nèi)平衡、細(xì)胞增殖、分化以及凋亡的作用。C2C12細(xì)胞是小鼠的成肌細(xì)胞，在體外可分化形成具有收縮性的肌管而被應(yīng)用于體外骨骼肌的研究模型。 目的：研究體外條件下atRA對C2C12細(xì)胞增殖的影響；篩選對C2C12細(xì)胞增殖無影響的最大濃度，研究上述濃度的atRA對C2C12細(xì)胞凋亡和肌向分化過程的影響。 方法：1、通過CCK-8法及流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度atRA對C2C12細(xì)胞的增殖及細(xì)胞周期的影響，并選出體外條件下atRA對C2C12細(xì)胞系增殖無影響的最大濃度；2、在上述atRA濃度下，用熒光標(biāo)記Annexin V和核酸染料PI通過流式細(xì)胞儀檢測其對C2C12細(xì)胞凋亡的影響；3、應(yīng)用SYBR GreenⅠ實時定量PCR技術(shù)檢測肌向誘導(dǎo)分化狀態(tài)下的C2C12細(xì)胞系中生肌決定因子（Myf5、MyoD、Myogenin和MRF4）的表達水平變化；4、應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測C21C12細(xì)胞系肌向分化過程中Myosin的表達并觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果：1、CCK-8結(jié)果顯示當(dāng)atRA體外濃度達到40μM時，可使C2C12細(xì)胞的增殖水平下降，有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；流式細(xì)胞結(jié)果顯示當(dāng)atRA體外濃度≤1μM時，對細(xì)胞周期無影響；當(dāng)atRA濃度大于1μM時，可使在G0/G1期的C2C12細(xì)胞比例明顯上升，有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。 2、當(dāng)在體外培養(yǎng)C2C12細(xì)胞中添加1μM的atRA時，實驗組與對照組中細(xì)胞凋亡水平無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 3、當(dāng)在體外肌向誘導(dǎo)分化條件下培養(yǎng)的C2C12細(xì)胞中添加1μM的atRA時，Myf5在實驗組和對照組表達均呈上升趨勢，但實驗組低于對照組，且在分化第2天時二者結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；實驗組中MyoD的表達在分化第0.5天時高于對照組且有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；Myogenin在實驗組和對照組表達均呈上升趨勢，實驗組均高于對照組且在分化第2天時二者結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；MRF4的表達在各個時間點均無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 4、Myosin表達于多核肌管的胞漿。分化第2天時，實驗組和對照組均有多核肌管出現(xiàn)。到分化第6天時，更多發(fā)生分化的肌細(xì)胞融合形成更長的多核肌管。實驗組中的肌管形態(tài)較對照組中更為細(xì)長。同時Myosin在多核肌管的表達逐漸增強。 結(jié)論：在C2C12細(xì)胞體外培養(yǎng)中，，atRA對細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期影響均呈濃度依賴相關(guān)性；1μM的atRA對C2C12細(xì)胞凋亡無顯著影響，但對其肌向分化具有明顯調(diào)控作用。
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【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R329

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 秦瑞峰,顧曉明;生肌調(diào)節(jié)因子在肌肉發(fā)生和發(fā)育中的作用[J];口腔頜面外科雜志;2001年03期

2 劉桂中,趙劍華,王秀琴;維甲酸信號通路的生物學(xué)進展[J];生理科學(xué)進展;2000年04期

3 王紅月,宋來鳳;心臟發(fā)育與維甲酸信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[J];生命的化學(xué)(中國生物化學(xué)會通訊);1997年04期

4 趙微;薛建華;;小鼠成肌細(xì)胞培養(yǎng)方法的建立與優(yōu)化[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2008年04期

本文編號：2277317