【摘要】：背景：全反式維甲酸（atRA）是維生素A的活性代謝產(chǎn)物，通過(guò)與受體結(jié)合來(lái)發(fā)揮其在胚胎發(fā)育和器官形成、組織內(nèi)平衡、細(xì)胞增殖、分化以及凋亡的作用。C2C12細(xì)胞是小鼠的成肌細(xì)胞，在體外可分化形成具有收縮性的肌管而被應(yīng)用于體外骨骼肌的研究模型。 目的：研究體外條件下atRA對(duì)C2C12細(xì)胞增殖的影響；篩選對(duì)C2C12細(xì)胞增殖無(wú)影響的最大濃度，研究上述濃度的atRA對(duì)C2C12細(xì)胞凋亡和肌向分化過(guò)程的影響。 方法：1、通過(guò)CCK-8法及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度atRA對(duì)C2C12細(xì)胞的增殖及細(xì)胞周期的影響，并選出體外條件下atRA對(duì)C2C12細(xì)胞系增殖無(wú)影響的最大濃度；2、在上述atRA濃度下，用熒光標(biāo)記Annexin V和核酸染料PI通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)其對(duì)C2C12細(xì)胞凋亡的影響；3、應(yīng)用SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)肌向誘導(dǎo)分化狀態(tài)下的C2C12細(xì)胞系中生肌決定因子（Myf5、MyoD、Myogenin和MRF4）的表達(dá)水平變化；4、應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)C21C12細(xì)胞系肌向分化過(guò)程中Myosin的表達(dá)并觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果：1、CCK-8結(jié)果顯示當(dāng)atRA體外濃度達(dá)到40μM時(shí)，可使C2C12細(xì)胞的增殖水平下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；流式細(xì)胞結(jié)果顯示當(dāng)atRA體外濃度≤1μM時(shí)，對(duì)細(xì)胞周期無(wú)影響；當(dāng)atRA濃度大于1μM時(shí)，可使在G0/G1期的C2C12細(xì)胞比例明顯上升，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 2、當(dāng)在體外培養(yǎng)C2C12細(xì)胞中添加1μM的atRA時(shí)，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中細(xì)胞凋亡水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。 3、當(dāng)在體外肌向誘導(dǎo)分化條件下培養(yǎng)的C2C12細(xì)胞中添加1μM的atRA時(shí)，Myf5在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組表達(dá)均呈上升趨勢(shì)，但實(shí)驗(yàn)組低于對(duì)照組，且在分化第2天時(shí)二者結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；實(shí)驗(yàn)組中MyoD的表達(dá)在分化第0.5天時(shí)高于對(duì)照組且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；Myogenin在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組表達(dá)均呈上升趨勢(shì)，實(shí)驗(yàn)組均高于對(duì)照組且在分化第2天時(shí)二者結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；MRF4的表達(dá)在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。 4、Myosin表達(dá)于多核肌管的胞漿。分化第2天時(shí)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均有多核肌管出現(xiàn)。到分化第6天時(shí)，更多發(fā)生分化的肌細(xì)胞融合形成更長(zhǎng)的多核肌管。實(shí)驗(yàn)組中的肌管形態(tài)較對(duì)照組中更為細(xì)長(zhǎng)。同時(shí)Myosin在多核肌管的表達(dá)逐漸增強(qiáng)。 結(jié)論：在C2C12細(xì)胞體外培養(yǎng)中，，atRA對(duì)細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期影響均呈濃度依賴(lài)相關(guān)性；1μM的atRA對(duì)C2C12細(xì)胞凋亡無(wú)顯著影響，但對(duì)其肌向分化具有明顯調(diào)控作用。
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【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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本文編號(hào)：2277317