發(fā)布時(shí)間：2018-10-05 09:16

【摘要】：第一部分：小鼠嗅鞘細(xì)胞的分離培養(yǎng)和形態(tài)學(xué)的初步研究 目的：研究小鼠嗅鞘細(xì)胞(OECs)體外培養(yǎng)的不同方法,為獲取數(shù)量多,活性好,形態(tài)優(yōu)的嗅鞘細(xì)胞提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法：4只出生2～3個(gè)月的BALB/c小鼠,經(jīng)枕骨大孔取嗅球,剝離嗅球外周兩層制成細(xì)胞懸液。采取未純化培養(yǎng)對照組、一次差速貼壁結(jié)合阿糖胞苷(Ara-c)純化與多聚左旋賴氨酸包被培養(yǎng)板培養(yǎng)組(純化包被組)和一次差速貼壁結(jié)合Ara-c純化與未用多聚左旋賴氨酸包被培養(yǎng)板培養(yǎng)組(純化未包被組)分別培養(yǎng)小鼠OECs,觀察其原代和傳代培養(yǎng)的細(xì)胞生長狀況及形態(tài),并進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定。結(jié)果：純化未包被組OECs早中期無論數(shù)量還是形態(tài)都優(yōu)于純化包被組,而未純化對照組的OECs早中期數(shù)量明顯優(yōu)于純化組。結(jié)論：一次差速貼壁結(jié)合Ara-c純化未包被進(jìn)行小鼠OECs培養(yǎng)是一種簡捷有效地方法。 第二部分：大鼠嗅鞘細(xì)胞的分離培養(yǎng)和形態(tài)學(xué)的初步研究 目的：研究大鼠嗅鞘細(xì)胞(olfactory ensheathing cells, OECs)體外培養(yǎng)的不同方法,為獲取數(shù)量多、活性好、形態(tài)優(yōu)的嗅鞘細(xì)胞提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)資料。方法：2只出生2～3個(gè)月的SD (Sprague Dawley)大鼠,經(jīng)枕骨大孔取嗅球,剝離嗅球外周兩層制成細(xì)胞懸液。采取一次差速貼壁結(jié)合阿糖胞苷(Ara-c)純化與多聚左旋賴氨酸包被培養(yǎng)板培養(yǎng)(純化包被組)和一次差速貼壁結(jié)合Ara-c純化與未用多聚左旋賴氨酸包被培養(yǎng)板培養(yǎng)(純化未包被組)分別培養(yǎng)大鼠OECs,觀察其原代和傳代培養(yǎng)的細(xì)胞生長狀況及形態(tài),并進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定。結(jié)果：純化包被組大鼠OECs無論數(shù)量還是形態(tài)都優(yōu)于純化未包被組。結(jié)論：大鼠OECs培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)板必須進(jìn)行包被處理。圖7表1參考文獻(xiàn)17 第三部分：小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定 目的：探索新生小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte, AST)的分離、培養(yǎng)和鑒定以利于嗅鞘細(xì)胞(olfactory ensheathing cells, OECs)的培養(yǎng)。方法：取1只新生的BALB/c小鼠,分離脊髓并制成細(xì)胞懸液、參照OECs的培養(yǎng)方法培養(yǎng)新生小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞,用GFAP(膠質(zhì)纖維酸性蛋白)、N200(神經(jīng)微絲蛋白)、S100(硫100)免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法分別鑒定。結(jié)果：S100免疫細(xì)胞化學(xué)染色的星形膠質(zhì)細(xì)胞無論數(shù)量和形態(tài)都明顯優(yōu)于GFAP免疫細(xì)胞化學(xué)染色。結(jié)論：S100免疫細(xì)胞化學(xué)染色是鑒定星形膠質(zhì)細(xì)胞最好的方法,星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)可用OECs的培養(yǎng)方法,但須去除胰蛋白酶消化步驟。圖7表0參考文獻(xiàn)8 第四部分：小鼠嗅鞘細(xì)胞與脊髓組織細(xì)胞共培養(yǎng)的研究 目的：研究小鼠嗅鞘細(xì)胞(OECs)在體外與脊髓組織細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)對脊髓組織細(xì)胞生長狀況的影響。方法：取新生BALB/c小鼠嗅球和脊髓分別進(jìn)行培養(yǎng),共分三組：一組小鼠OECs培養(yǎng)、一組脊髓組織細(xì)胞培養(yǎng)、一組OECs與脊髓組織細(xì)胞共培養(yǎng)。通過倒置相差顯微鏡觀察各組生長情況,并通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察和鑒定、計(jì)算細(xì)胞數(shù)、測定細(xì)胞活性。結(jié)果：OECs與脊髓組織細(xì)胞共培養(yǎng)組細(xì)胞密度明顯高于兩對照組,共培養(yǎng)組NF200和GAP43染色明顯多于脊髓組織細(xì)胞培養(yǎng)組,OECs培養(yǎng)組不染色。OECs且對星形膠質(zhì)細(xì)胞生長具有抑制作用。結(jié)論：嗅鞘細(xì)胞對脊髓組織神經(jīng)元細(xì)胞生長具有明顯的促進(jìn)作用。圖7表0參考文獻(xiàn)7
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【學(xué)位授予單位】：安徽理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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1 王樹森;羅卓荊;韓一生;胡蘊(yùn)玉;李明全;劉慧玲;呂榮;孟國林;;嗅鞘細(xì)胞復(fù)合于定向性硫酸肝素-膠原蛋白支架移植促進(jìn)脊髓損傷軸突再生[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2008年21期

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本文編號：2252832