【摘要】：目的:探討Notch信號對骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)誘導(dǎo)間充質(zhì)干細胞成骨分化的影響以及作用機制。方法:(1)DAPT或Ad-dominant-negative mutants of Notch1(Addn Notch1)和BMP4-CM處理小鼠胚胎成纖維細胞,檢測早期成骨指標堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP);(2)茜素紅S染色實驗檢測晚期成骨鈣鹽沉積情況;(3)半定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測成骨分化相關(guān)基因ALP,Runx2,Col1a1的表達;(4)免疫細胞化學(xué)檢測p-Smad1/5/8的表達;(5)結(jié)晶紫染色和流式細胞術(shù)檢測細胞的增殖及周期改變。結(jié)果:(1)DAPT抑制BMP4誘導(dǎo)的早期成骨分化,且呈濃度依賴性;(2)Delta-like 1(DLL1)促進BMP4誘導(dǎo)的成骨分化,DAPT和dn Notch1抑制BMP4誘導(dǎo)的成骨分化;(3)DLL1促進BMP4誘導(dǎo)的成骨相關(guān)基因ALP,Runx2,Col1a1的表達,DAPT抑制這些基因的表達;(4)DLL1促進BMP4誘導(dǎo)的細胞核內(nèi)p-Smad1/5/8的表達,而DAPT抑制其表達;(5)DLL1促進BMP4誘導(dǎo)的細胞增殖,而DAPT抑制BMP4誘導(dǎo)的細胞增殖。結(jié)論:Notch信號通過BMP/Smads信號通路促進BMP4誘導(dǎo)的MSCs成骨分化,在此過程中也有促細胞增殖的作用。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of Notch signal on osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells induced by bone morphogenetic protein 4 (BMP4) and its mechanism. Methods: (1) Mouse embryonic fibroblasts were treated with DAPT or Ad-dominant-negative mutants of Notch1 (Addn Notch1) and BMP4-CM. Detection of early osteogenesis index (alkaline phosphatase,ALP); (2) alizarin red S staining for late osteogenic calcium deposition; (3) semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) to detect the expression of osteoblast differentiation related gene ALP,Runx2,Col1a1; (4) immunocytochemistry (5) Crystal violet staining and flow cytometry were used to detect cell proliferation and cell cycle change. Results: (1) DAPT inhibited early osteogenic differentiation induced by BMP4. (2) Delta-like 1 (DLL1) promoted BMP4 induced osteogenic differentiation and dn Notch1 inhibited BMP4 induced osteogenic differentiation; (3) DLL1 enhanced BMP4 induced osteoblast related gene ALP,Runx2,Col1a1 expression; (4) DLL1 enhanced BMP4 induced nuclear p-Smad1/5/8 expression. DAPT inhibited its expression, (5) DLL1 promoted BMP4 induced cell proliferation, while DAPT inhibited BMP4 induced cell proliferation. Conclusion the BMP/Smads signaling pathway promotes the osteogenic differentiation of MSCs induced by BMP4, and it also promotes the proliferation of MSCs cells.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗醫(yī)學(xué)院臨床檢驗診斷學(xué)教育部重點實驗室;
【基金】：重慶市自然科學(xué)基金(CSTC2012jj A10004;KJ130305)資助項目
【分類號】：R329.2

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10 ;[J];;年期

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本文編號：2220819