【摘要】：目的:研究ICOS在健康人外周血Treg離體培養(yǎng)中的作用,了解m TOR對離體培養(yǎng)Treg ICOS表達的調控。方法:MACS分選Treg后經anti-CD3+anti-CD28磁珠刺激后第3、7天流式檢測Treg表面ICOS表達情況;anti-CD3+anti-CD28抗體或anti-CD3+ICOSL-Fc刺激3 d,流式檢測Treg ICOS表達情況;雷帕霉素處理離體培養(yǎng)Treg,流式分析其對Treg ICOS表達作用。CFSE標記人PBMC細胞,并與離體培養(yǎng)Treg混合培養(yǎng),流式檢測Treg的接觸抑制活性。結果:anti-CD3+anti-CD28磁珠刺激Treg 3 d,ICOS+Treg中活、死細胞的比例分別為(92.00±2.69)%和(2.20±0.56)%,在ICOS-Treg中比例為(90.30±3.53)%和(1.77±0.78)%,兩者無顯著差異;培養(yǎng)第7天,ICOS+Treg細胞比例從第3天(40.20±1.83)%降至(11.60±1.10)%;anti-CD3+ICOSL-FC刺激Treg 3 d后,ICOS MFI為(403.30±74.42),anti-CD3+anti-CD28刺激組為(2 410.0±746.4),anti-CD3+ICOSL-FC刺激后Treg ICOS表達相比anti-CD3+anti-CD28組顯著下降;雷帕霉素處理離體培養(yǎng)Treg細胞3 d后,ICOS表達下調。此外,雷帕霉素處理的離體培養(yǎng)Treg均能有效抑制PBMC中Tcon的分裂增殖。結論:ICOS表達高低對人外周血Treg存活率影響無顯著差異,m TOR信號并非調控人Treg離體培養(yǎng)ICOS表達的唯一因素,CD28協(xié)同信號對調控離體培養(yǎng)人Treg。表達比ICOSL信號更為重要,雷帕霉素處理的離體培養(yǎng)人Treg仍具有細胞接觸抑制活性。
[Abstract]:AIM: To study the role of ICOS in the culture of healthy human peripheral blood Treg in vitro, and to understand the regulation of M TOR on the expression of Treg ICOS in vitro. Methods: The expression of ICOS on Treg surface was detected by flow cytometry on the 3rd and 7th day after Treg was sorted by MACS and stimulated by anti-CD3 + anti-CD28 magnetic beads. Results: Anti-CD3 + anti-CD28 magnetic beads stimulated Treg 3 d, ICOS + Treg in vivo, and the proportion of dead cells were (92.00 +2.69)% and (2.20)% respectively. The percentage of ICOS+Treg cells in ICOS-Treg was (90.30+3.53)% and (1.77+0.78)%. On the 7th day of culture, the percentage of ICOS+Treg cells decreased from (40.20+1.83)% to (11.60+1.10)%. After stimulating Treg with anti-CD3+ICOSL-FC for 3 days, the percentage of ICOS-MFI was (403.30+74.42), that of anti-CD3+anti-CD28 stimulation group was (742.0+CD410.4), and that of anti-CD3+FCL stimulation group was (742.0+CD4), respectively. Compared with anti-CD3+anti-CD28 group, the expression of Treg ICOS was significantly decreased after treatment with rapamycin for 3 days, and the expression of ICOS was down-regulated after treatment with rapamycin for 3 days. CD28 synergistic signal is more important than ICOSL signal in regulating the expression of human Treg in vitro, and rapamycin-treated human Treg still has the activity of cell contact inhibition.
【作者單位】： 浙江省立同德醫(yī)院;
【基金】：浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計劃(2014KYA237)資助
【分類號】：R392

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本文編號：2195505