【摘要】：【目的】鑒定及克隆新型隱球酵母(Cryptococcus neoformans)中PolⅢ型的U6啟動子(Cn U6啟動子),并驗證CnU6啟動子能否有效轉(zhuǎn)錄shRNA及CRISPR/Cas9系統(tǒng)中g(shù)RNA�！痉椒ā拷Y(jié)合Gen Bank數(shù)據(jù)庫已公布的新型隱球酵母基因組信息和本實驗室RNA-seq文庫數(shù)據(jù),利用生物信息學(xué)技術(shù)分析得到新型隱球酵母中具有高轉(zhuǎn)錄水平的U6RNA序列。使用重疊PCR和Easy Geno方法將預(yù)測的CnU6啟動子分別克隆到sh RNA及gRNA的上游區(qū)域,通過觀察shRNA對靶基因的RNAi效果及gRNA引導(dǎo)Cas9核酸酶對靶位點的切割結(jié)果,確定CnU6啟動子能否轉(zhuǎn)錄短RNA�！窘Y(jié)果】CnU6啟動子能夠轉(zhuǎn)錄形成shRNA對靶基因進(jìn)行沉默,并且能轉(zhuǎn)錄形成g RNA引導(dǎo)Cas9核酸酶對靶點進(jìn)行切割�！窘Y(jié)論】新型隱球酵母的CnU6啟動子被成功鑒定及克隆,它能有效驅(qū)動shRNA和gRNA的轉(zhuǎn)錄。
[Abstract]:[objective] to identify and clone the U6 promoter of Pol type 鈪，

本文編號：2195508