【摘要】：超低溫冷凍保存神經(jīng)干細胞(Neural Stem Cells, NSCs)對神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病和組織損傷等疾病的臨床治療具有十分重要的意義。 本文對神經(jīng)干細胞的體外培養(yǎng)進行研究,通過細胞形態(tài)學觀察、臺盼藍染色法、Hochest/PI熒光雙重染色法及生長曲線的測定。證明了所培養(yǎng)的細胞具有增殖能力等神經(jīng)干細胞的主要特性,保證了實驗材料的生物活性,為后續(xù)實驗提供充足的細胞來源。 通過滲透壓技術(shù)對冷凍保護劑(cryoprotective agent, CPA)的濃度進行實驗測定。本文選取了兩種冷凍保護劑,考察了冷凍保護劑種類、濃度、細胞密度等因素對神經(jīng)干細胞的影響。實驗結(jié)果表明,滲透壓法是一種既簡潔又準確的表征溶液中主要溶質(zhì)濃度的方法；冷凍保護劑在導(dǎo)入過程中造成的細胞損傷主要為滲透損傷和毒性損傷,受二者共同作用存在冷凍保護劑最佳導(dǎo)入時間和最優(yōu)導(dǎo)入方案。 采用顯微圖像采集分析的方法,以氯化鈉為神經(jīng)干細胞的非滲透性溶質(zhì),成功獲得懸浮神經(jīng)干細胞滲透不變體積比為0.391。最后,分別應(yīng)用K-K模型和經(jīng)典兩參數(shù)模型來表征CPA和水在神經(jīng)干細胞中一維輸運的物理過程。確定保護劑二甲基亞砜(DMSO)和乙二醇(EG)導(dǎo)入神經(jīng)干細胞時的三個滲透參數(shù)Lp(水的胞膜滲透率)、ω(保護劑的胞膜滲透率)、σ(反射系數(shù))值。結(jié)果分別為：K-K模型DMSO：Lp=0.172μm/minatm, co=8.980×10-2μm/s,σ=0.92; EG:Lp=0.198μm/min atm, co=7.880×10-2μm/s, a=0.90;2-P模型DMSO:Lp=0.168μm/min atm,ω=9.081×10-2μm/s; EG:Lp=0.174μm/min atm,ω=8.009×10-2μm/s。為進一步優(yōu)化冷凍保護劑在神經(jīng)干細胞中的導(dǎo)入和洗脫方案提供參考。
[Abstract]:Cryopreservation of neural stem cells (NSCs) is of great significance for the clinical treatment of neurodegenerative diseases and tissue damage. In this paper, the in vitro culture of neural stem cells was studied. Cell morphology, trypan blue staining, Hochest-Pi fluorescence double staining and growth curve measurement were used. It is proved that the cultured cells have the main characteristics of neural stem cells such as proliferative ability, which ensures the biological activity of the experimental materials and provides sufficient cell sources for the subsequent experiments. The concentration of cryopreservation agent (cryoprotective agent, CPA was determined by osmotic pressure technique. In this paper, two kinds of cryopreservation agents were selected to investigate the effects of the types, concentrations and cell density of cryopreservation agents on neural stem cells (NSCs). The results show that osmotic pressure method is a simple and accurate method to characterize the concentration of major solutes in solution, and the cell damage caused by cryopreservation agent is mainly osmotic damage and toxic damage. The best import time and the optimal import scheme of the freezing protectant are existed. By means of microscopic image acquisition and analysis, using sodium chloride as the impermeable solute of neural stem cells, the immutable osmotic volume ratio of suspension neural stem cells was 0.391. Finally, K-K model and classical two-parameter model were used to characterize the one-dimensional transport of CPA and water in neural stem cells. The values of three permeable parameters L _ p (cell membrane permeability of water), 蠅 (cell membrane permeability of protection agent) and 蟽 (reflection coefficient) were determined when dimethyl sulfoxide (DMSO) and ethylene glycol (EG) were introduced into neural stem cells. The results were as follows: DMSOO: Lp1 0.172 渭 m / min atm, co=8.980 脳 10 -2 渭 m / s, 蟽 0.92; EGSO: LpX 0.198 渭 m/min atm, co=7.880 脳 10 -2 渭 m / s, a0. 90-2 渭 m / s, a0. 902-P model DMSOL: Lp0. 168 渭 m/min atm, omega 9.081 脳 10 -2 渭 m / s; EGO: Lpn 0. 174 渭 m/min atm, 蠅 8. 009 脳 10 -2 渭 m / s. To further optimize the cryopreservation agent in neural stem cells into the introduction and elution program to provide a reference.
【學位授予單位】：大連理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R329

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鄭學勝,朱曉峰;抗體封閉膜受體方法在神經(jīng)干細胞研究中的應(yīng)用[J];黑龍江醫(yī)藥科學;2002年05期

2 谷海剛,龍大宏,冷水龍;新生鼠基底前腦神經(jīng)干細胞的分離和培養(yǎng)[J];解剖學研究;2003年02期

3 祝勝;神經(jīng)干細胞在腦外傷中的治療前景[J];現(xiàn)代診斷與治療;2003年01期

4 張卿,左萍萍;神經(jīng)干細胞誘導(dǎo)分化的研究進展[J];中國康復(fù)理論與實踐;2003年07期

5 何揚東,曾進勝;腦缺血后內(nèi)源性神經(jīng)干細胞活化的研究進展[J];中國腦血管病雜志;2004年05期

6 趙宇,呂剛;神經(jīng)干細胞與脊髓損傷的修復(fù)研究現(xiàn)狀與展望[J];解剖科學進展;2005年01期

7 周向陽,鄧永文,方芳,伍軍,李茗初,高峻瑋,柳浩然,方加勝;星形膠質(zhì)細胞誘導(dǎo)神經(jīng)干細胞定向分化試驗研究(英文)[J];中國醫(yī)學工程;2005年03期

8 張全斌,黃強,蘭青;腦腫瘤干細胞的熱點問題及研究進展[J];中華醫(yī)學雜志;2005年26期

9 ;神經(jīng)干細胞能修復(fù)受損脊髓[J];生命世界;2005年11期

10 徐南飛;;干細胞在神經(jīng)系統(tǒng)疾病治療中的應(yīng)用[J];神經(jīng)疾病與精神衛(wèi)生;2007年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 孫一睿;胡錦;王爾松;奚才華;姚海軍;;單層黏附培養(yǎng)技術(shù)在哺乳動物神經(jīng)干細胞體外穩(wěn)定增殖和多向分化中的應(yīng)用[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

2 李力;萬琪;劉永紅;張巍;;小鼠神經(jīng)干細胞培養(yǎng)及缺血神經(jīng)元對其增殖、分化的影響[A];科技、工程與經(jīng)濟社會協(xié)調(diào)發(fā)展——中國科協(xié)第五屆青年學術(shù)年會論文集[C];2004年

3 田東萍;蘇敏;吳賢英;張舸;;硒、B-27在神經(jīng)干細胞球存活與分化中的作用[A];中華醫(yī)學會病理學分會2005年學術(shù)年會論文匯編[C];2005年

4 楊華靜;徐鵬;張?zhí)K明;;低濃度β-淀粉樣蛋白對神經(jīng)干細胞的作用機制研究[A];第十一屆全國神經(jīng)病學學術(shù)會議論文匯編[C];2008年

5 文玉軍;王登科;孫征;劉海洋;張蓮香;秦毅;;成年和老年大鼠腦出血后海馬齒狀回神經(jīng)干細胞的變化[A];中國解剖學會2011年年會論文文摘匯編[C];2011年

6 張波;王任直;;腦梗死后神經(jīng)干細胞原位增殖及其機理的實驗研究[A];中國微循環(huán)學會第五屆中國微循環(huán)學術(shù)大會論文摘要匯編[C];2004年

7 邢雪松;呂威力;;Wnt-1在大鼠腦缺血再灌注海馬組織內(nèi)源性神經(jīng)干細胞早期增殖分化中的作用[A];創(chuàng)新沈陽文集（B）[C];2009年

8 朱慧;李曉紅;戚菁;施維;吳信華;陸玉華;鞠少卿;劉炎;;Pax3負性調(diào)控神經(jīng)干細胞分化過程中膠質(zhì)纖維酸性蛋白的表達[A];2010’全國腫瘤分子標志及應(yīng)用學術(shù)研討會暨第五屆中國中青年腫瘤專家論壇論文匯編[C];2010年

9 李革飛;李劍平;;應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測神經(jīng)干細胞表面標志物-Nestin[A];中國輸血協(xié)會第五屆輸血大會論文專集（摘要篇）[C];2010年

10 姚立松;劉天慶;葛丹;崔占峰;馬學虎;;海藻酸鈣微膠珠培養(yǎng)神經(jīng)干細胞[A];第一屆全國化學工程與生物化工年會論文摘要集(下)[C];2004年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 時仲省 高思敏;移植神經(jīng)干細胞 癱瘓兔子可爬行[N];大眾衛(wèi)生報;2001年

2 王成應(yīng);能克隆的神經(jīng)干細胞被分離[N];健康報;2004年

3 孫國根;神經(jīng)干細胞并非“全能制造者”[N];中國醫(yī)藥報;2009年

4 劉海英;腦癌源于腦下室區(qū)的神經(jīng)干細胞[N];科技日報;2009年

5 孫國根　白毅;靈長類腦內(nèi)神經(jīng)干細胞被發(fā)現(xiàn)[N];中國醫(yī)藥報;2011年

6 沈麗 付鈺;神奇的神經(jīng)干細胞[N];科技日報;2002年

7 北京康復(fù)中心神經(jīng)外科 黃紅云;神經(jīng)干細胞之謎[N];健康報;2008年

8 記者 吳苡婷;為腦損傷患者治療打開希望之門[N];上�？萍紙�;2009年

9 劉霞;美將成人皮膚細胞變成神經(jīng)干細胞[N];科技日報;2011年

10 錢勇 韓瑋;低溫保存血小板技術(shù)[N];科技日報;2001年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 鄭敏;神經(jīng)干細胞定向分化與移植治療帕金森病的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學;2003年

2 盧洪流;成年大鼠腦內(nèi)神經(jīng)干細胞的在體研究[D];第二軍醫(yī)大學;2001年

3 李巍;神經(jīng)干細胞的分化調(diào)控及BDNF基因修飾后對大鼠脊髓損傷修復(fù)的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2002年

4 張力;人胚神經(jīng)干細胞及骨髓基質(zhì)細胞移植治療帕金森病恒河猴模型的實驗研究[D];復(fù)旦大學;2003年

5 戴宜武;骨髓基質(zhì)細胞定向分化為神經(jīng)干細胞及自體移植治療中腦損傷研究[D];第一軍醫(yī)大學;2002年

6 張所軍;神經(jīng)干細胞向膠質(zhì)瘤干細胞遷移及對其生長特性的影響[D];華中科技大學;2011年

7 張在金;神經(jīng)干細胞移植治療大鼠腦創(chuàng)傷的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學;2005年

8 尹豐;人視網(wǎng)膜色素上皮細胞治療帕金森病的實驗與臨床研究[D];第二軍醫(yī)大學;2006年

9 譚太貴;多通道PLGA脊髓再生介導(dǎo)管道治療大鼠脊髓半橫斷損傷[D];天津醫(yī)科大學;2006年

10 高國一;胎鼠腦神經(jīng)干細胞鑒定純化與生物學特性觀察[D];第二軍醫(yī)大學;2002年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 吳琿;神經(jīng)干細胞玻璃化凍存及其生物學特性的研究[D];大連理工大學;2011年

2 馮年花;人誘導(dǎo)性多能干細胞向神經(jīng)干細胞分化的實驗研究[D];南昌大學;2010年

3 宋精梅;比較新生大鼠腦部不同部位的神經(jīng)干細胞被誘導(dǎo)分化為少突膠質(zhì)細胞的差異[D];福建醫(yī)科大學;2010年

4 李政;內(nèi)皮祖細胞調(diào)控神經(jīng)干細胞分化及其機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2010年

5 王念;絞股藍皂苷對脊髓源神經(jīng)干細胞體外培養(yǎng)的影響[D];陜西師范大學;2011年

6 劉朋;海藻酸鈣/明膠微膠珠的制備及在神經(jīng)干細胞培養(yǎng)中的應(yīng)用[D];大連理工大學;2011年

7 郭兵;大鼠羊膜上皮細胞體外向類神經(jīng)干細胞誘導(dǎo)分化及其移植后對視神經(jīng)再生的作用[D];第二軍醫(yī)大學;2010年

8 王培福;大鼠神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)和鑒定[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2002年

9 劉孟宇;膠質(zhì)瘤細胞條件培養(yǎng)基對神經(jīng)干細胞遷移的影響[D];蘇州大學;2010年

10 朱愛萍;重復(fù)經(jīng)顱磁刺激對帕金森病模型小鼠體內(nèi)神經(jīng)干細胞增殖的影響[D];河北醫(yī)科大學;2010年

，

本文編號：2128413