本文選題：人巨細胞病毒 + 固有免疫　； 參考：《華中科技大學(xué)》2011年博士論文

【摘要】：[目的] ①證實AIM2是識別HCMV的DNA感受器； ②明確HCMV感染THP-1源性巨噬細胞對AIM2炎性體通路中各信號分子的影響； ③證實AIM2炎性體通路參與抗HCMV固有免疫促炎細胞因子反應(yīng)。 [方法] ①建立HCMV感染THP-1源性巨噬細胞模型：HCMV (AD169株)以MOI=1接種至已用PMA刺激分化的THP-1細胞,建立HCMV感染THP-1源性巨噬細胞模型,同時設(shè)立模擬感染對照組、LPS+ATP對照組和poly(dA:dT)對照組； ②Real-time RT-PCR法定量檢測HCMV感染組和模擬感染對照組DNA感受器AIM2、polⅢ、DAI和TLR9基因轉(zhuǎn)錄水平； ③Real-time RT-PCR法定量檢鋇HCMV感染組和模擬感染對照組IL-1β基因轉(zhuǎn)錄強度； ④在HCMV感染后1 h、3 h、6 h、12 h和24 h,用western blot法檢測HCMV感染組、模擬感染對照組和LPS+ATP對照組AIM2、ASC、Caspase-1和IL-1β蛋白表達變化；并設(shè)立轉(zhuǎn)染poly(dA:dT)后24 h的poly(dA:dT)對照組； ⑤用針對AIM2和ASC的siRNA,分別轉(zhuǎn)染THP-1源性巨噬細胞,轉(zhuǎn)染后24 h再感染HCMV AD 169毒株,并設(shè)模擬轉(zhuǎn)染對照組。在感染后6 h,用Western blot法檢測細胞內(nèi)AIM2、ASC、Caspase-1和IL-1β蛋白表達,并與模擬感染對照組比較； ⑥用特異性Caspase-1抑制劑(Ac-YVAD-CHO)處理THP-1源性巨噬細胞后,再感染HCMV AD 169毒株,同時設(shè)模擬處理對照組,在感染后6 h,用Western blot檢測細胞內(nèi)ASC、Caspase-1、pro-IL-1β和IL-1β蛋白表達水平,并與模擬感染對照組計較。 [結(jié)果] HCMV感染THP-1源性巨噬細胞后6 h可引起DNA感受器AIM2、PolⅢ、DAI基因高表達,而TLR9變化不明顯； ②HCMV感染THP-1源性巨噬細胞后6 h引起促炎細胞因子IL-1β基因高表達； ③HCMV感染THP-1源性巨噬細胞引起AIM2炎性體相關(guān)蛋白AIM2、ASC和Caspase-1時序性高表達； ④HCMV感染THP-1源性巨噬細胞誘導(dǎo)促炎細胞因子IL-1β蛋白高表達； ⑤AIM2 siRNA可抑制HCMV誘導(dǎo)的AIM2炎性體相關(guān)蛋白AIM2.Caspase-1和IL-1β的高表達,但對ASC蛋白表達無影響； ⑥ASC siRNA可抑制HCMV引起AIM2炎性體相關(guān)蛋白ASC.Caspase-1和IL-1β的高表達,但對AIM2蛋白表達無影響； ⑦特異性Caspase-1抑制劑Ac-YVAD-CHO對HCMV誘導(dǎo)的AIM2炎性體蛋白AIM2. ASC和Caspase-1及pro-IL-1β的表達都無影響,但可抑制HCMV感染所致的成熟IL-1β蛋白表達升高。 [結(jié)論] ①AIM2是胞質(zhì)內(nèi)免疫識別HCMV dsDNA的DNA感受器； ②HCMV感染可誘導(dǎo)AIM2炎性體通路AIM2.ASC和Caspase-1蛋白高表達； ③HCMV感染可引起促炎細胞因子IL-1β蛋白高表達； ④AIM2炎性體通路參與抗HCMV固有免疫反應(yīng)中IL-1β的成熟和活化。
[Abstract]:[objective] 1 to confirm that AIM2 is a DNA receptor that recognizes HCMV, 2 to clarify the effect of HCMV infection on signal molecules in AIM2 inflammatory pathway by THP-1 derived macrophages. 3 it was confirmed that AIM2 inflammatory pathway was involved in anti-HCMV innate immune proinflammatory cytokine response. [methods] 1 HCMV infected THP-1 derived macrophage model was established by inoculating with MOI1 to THP-1 cells stimulated by PMA, and HCMV infected THP-1 derived macrophage model was established. The transcriptional levels of AIM2Pol 鈪，

本文編號：2103727