本文選題：人巨細(xì)胞病毒 + 固有免疫�。� 參考：《華中科技大學(xué)》2011年博士論文

【摘要】：[目的] ①證實(shí)AIM2是識(shí)別HCMV的DNA感受器； ②明確HCMV感染THP-1源性巨噬細(xì)胞對(duì)AIM2炎性體通路中各信號(hào)分子的影響； ③證實(shí)AIM2炎性體通路參與抗HCMV固有免疫促炎細(xì)胞因子反應(yīng)。 [方法] ①建立HCMV感染THP-1源性巨噬細(xì)胞模型：HCMV (AD169株)以MOI=1接種至已用PMA刺激分化的THP-1細(xì)胞,建立HCMV感染THP-1源性巨噬細(xì)胞模型,同時(shí)設(shè)立模擬感染對(duì)照組、LPS+ATP對(duì)照組和poly(dA:dT)對(duì)照組； ②Real-time RT-PCR法定量檢測HCMV感染組和模擬感染對(duì)照組DNA感受器AIM2、polⅢ、DAI和TLR9基因轉(zhuǎn)錄水平； ③Real-time RT-PCR法定量檢鋇HCMV感染組和模擬感染對(duì)照組IL-1β基因轉(zhuǎn)錄強(qiáng)度； ④在HCMV感染后1 h、3 h、6 h、12 h和24 h,用western blot法檢測HCMV感染組、模擬感染對(duì)照組和LPS+ATP對(duì)照組AIM2、ASC、Caspase-1和IL-1β蛋白表達(dá)變化；并設(shè)立轉(zhuǎn)染poly(dA:dT)后24 h的poly(dA:dT)對(duì)照組； ⑤用針對(duì)AIM2和ASC的siRNA,分別轉(zhuǎn)染THP-1源性巨噬細(xì)胞,轉(zhuǎn)染后24 h再感染HCMV AD 169毒株,并設(shè)模擬轉(zhuǎn)染對(duì)照組。在感染后6 h,用Western blot法檢測細(xì)胞內(nèi)AIM2、ASC、Caspase-1和IL-1β蛋白表達(dá),并與模擬感染對(duì)照組比較； ⑥用特異性Caspase-1抑制劑(Ac-YVAD-CHO)處理THP-1源性巨噬細(xì)胞后,再感染HCMV AD 169毒株,同時(shí)設(shè)模擬處理對(duì)照組,在感染后6 h,用Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)ASC、Caspase-1、pro-IL-1β和IL-1β蛋白表達(dá)水平,并與模擬感染對(duì)照組計(jì)較。 [結(jié)果] HCMV感染THP-1源性巨噬細(xì)胞后6 h可引起DNA感受器AIM2、PolⅢ、DAI基因高表達(dá),而TLR9變化不明顯； ②HCMV感染THP-1源性巨噬細(xì)胞后6 h引起促炎細(xì)胞因子IL-1β基因高表達(dá)； ③HCMV感染THP-1源性巨噬細(xì)胞引起AIM2炎性體相關(guān)蛋白AIM2、ASC和Caspase-1時(shí)序性高表達(dá)； ④HCMV感染THP-1源性巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子IL-1β蛋白高表達(dá)； ⑤AIM2 siRNA可抑制HCMV誘導(dǎo)的AIM2炎性體相關(guān)蛋白AIM2.Caspase-1和IL-1β的高表達(dá),但對(duì)ASC蛋白表達(dá)無影響； ⑥ASC siRNA可抑制HCMV引起AIM2炎性體相關(guān)蛋白ASC.Caspase-1和IL-1β的高表達(dá),但對(duì)AIM2蛋白表達(dá)無影響； ⑦特異性Caspase-1抑制劑Ac-YVAD-CHO對(duì)HCMV誘導(dǎo)的AIM2炎性體蛋白AIM2. ASC和Caspase-1及pro-IL-1β的表達(dá)都無影響,但可抑制HCMV感染所致的成熟IL-1β蛋白表達(dá)升高。 [結(jié)論] ①AIM2是胞質(zhì)內(nèi)免疫識(shí)別HCMV dsDNA的DNA感受器； ②HCMV感染可誘導(dǎo)AIM2炎性體通路AIM2.ASC和Caspase-1蛋白高表達(dá)； ③HCMV感染可引起促炎細(xì)胞因子IL-1β蛋白高表達(dá)； ④AIM2炎性體通路參與抗HCMV固有免疫反應(yīng)中IL-1β的成熟和活化。
[Abstract]:[objective] 1 to confirm that AIM2 is a DNA receptor that recognizes HCMV, 2 to clarify the effect of HCMV infection on signal molecules in AIM2 inflammatory pathway by THP-1 derived macrophages. 3 it was confirmed that AIM2 inflammatory pathway was involved in anti-HCMV innate immune proinflammatory cytokine response. [methods] 1 HCMV infected THP-1 derived macrophage model was established by inoculating with MOI1 to THP-1 cells stimulated by PMA, and HCMV infected THP-1 derived macrophage model was established. The transcriptional levels of AIM2Pol 鈪，

本文編號(hào)：2103727