本文選題：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 + IDO　； 參考：《蘇州大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：研究吲哚胺2，3-雙加氧酶（IDO）基因修飾的小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（IDO-BMSC）體外誘導(dǎo)免疫耐受作用，并探討其相關(guān)的免疫學(xué)機(jī)制。 方法：C57BL/6小鼠的BMSC與BALB/C小鼠骨髓來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）和脾臟單個(gè)核細(xì)胞（Splenic mononuclear cells，SMC）在體外按不同細(xì)胞比例共同培養(yǎng)4天。根據(jù)BMSC中IDO基因修飾與否，將實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組和基因修飾組，對(duì)照組和基因修飾組均設(shè)：A組：BMSC與DC共同培養(yǎng)（1：1），B組：BMSC與SMC共同培養(yǎng)（1：4），C組：BMSC與SMC共同培養(yǎng)（1：8），D組：BMSC與SMC共同培養(yǎng)（1：16），E組：BMSC與DC、SMC共同培養(yǎng)（BMSC：SMC=1：4），F(xiàn)組：BMSC與DC、SMC共同培養(yǎng)（BMSC：SMC=1：8），G組： BMSC與DC、SMC共同培養(yǎng)（BMSC：SMC=1：16），培養(yǎng)體系中均加入（1ug/ml）的脂多糖（LPS）。流式細(xì)胞術(shù)分析共培養(yǎng)前后樹(shù)突狀細(xì)胞表面分子表型變化及脾臟單個(gè)核細(xì)胞中FoxP3+Treg含量。微量樣本多指標(biāo)流式蛋白定量技術(shù)（CBA）檢測(cè)共培養(yǎng)上清中IL-2，IL-4，IL-6，IFN-γ，IL-17，IL-10的濃度。高效液相（HPLC）法檢測(cè)上清中色氨酸及犬尿氨酸濃度。RT-PCR檢測(cè)A、E組DC中IDOmRNA的表達(dá)。 結(jié)果：(1)BMSC與DC細(xì)胞以1：1的比例共培養(yǎng)(A組)，對(duì)照組DC與未成熟DC表型相似，而基因修飾組較對(duì)照組能明顯抑制DC成熟（P0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2) B、C、D組中FoxP3+Treg含量比較，基因修飾組FoxP3+Treg高于對(duì)照組（P0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；E、F、G組中FoxP3+Treg含量增加，基因修飾組高于對(duì)照組，P0.05，，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)組間比較B、C、D組，基因修飾組較對(duì)照組IL-2，IL-6，IFN-γ，IL-17明顯下降，而IL-4及IL-10明顯上升，P0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。組間比較E、F、G組，基因修飾組IL-2，IL-6明顯下降，而IL-4，IFN-γ明顯升高，P0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，IL-17，IL-10改變不明顯，P0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)基因修飾組IDO活性明顯高于對(duì)照組，P0.05。且在基因修飾組，E組IDO活性明顯高于A組，P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(5)基因修飾的E組中的DC中檢測(cè)出IDOmRNA的表達(dá)，對(duì)照組無(wú)IDOmRNA的表達(dá)。 結(jié)論：IDO基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能通過(guò)以下四條途徑誘導(dǎo)免疫耐受：1、IDO-BMSC能夠顯著抑制DC細(xì)胞的成熟，2、IDO-BMSC可以誘導(dǎo)FoxP3+Treg含量增加，3、IDO-BMSC能夠促進(jìn)抗炎因子，抑制促炎因子的分泌，4、IDO-BMSC通過(guò)SMC的橋梁作用誘導(dǎo)DC細(xì)胞產(chǎn)生IDO，進(jìn)而誘導(dǎo)免疫耐受。
[Abstract]:Aim: to investigate the induction of immune tolerance of mouse bone marrow mesenchymal stem cells (IDO-BMSC) modified with indoleamine 2o 3-dioxygenase (IDO) gene in vitro and to explore its immunological mechanism. Methods BMSCs from BMSCs of C57BL / 6 mice were co-cultured with dendritic cells (DC) derived from bone marrow and splenic mononuclear cells (SMC) of BMSCs from BALB / C mice for 4 days. According to the IDO gene modification in BMSC, the experiment was divided into two groups: control group and gene modified group. The control group and the gene modified group were divided into two groups: group A: BMSC co-cultured with DC (1:1); group B: BMSC and SMC co-cultured (1:4); group C: BMSC and SMC co-cultured (1:8); group D: BMSC and SMC co-cultured (1:8); group E: BMSC and DCSMC co-cultured Group F: BMSC: SMC 1: 8 (BMSC: SMC 1: 8) Group G: BMSC: SMC 1: 16. Lipopolysaccharide (1ug/ml) was added to the culture system. The changes of surface molecular phenotype of dendritic cells and the content of FoxP3 Treg in splenic mononuclear cells before and after co-culture were analyzed by flow cytometry. The concentration of IL-2, IL-4, IL-6, IFN- 緯, IL-17 and IL-10 in the supernatant of co culture was detected by flow protein quantitative assay (CBA). High performance liquid chromatography (HPLC) was used to detect the concentration of tryptophan and canine uric acid in supernatant. RT-PCR was used to detect the expression of Ido mRNA in DC of Agne group. Results: (1) BMSC and DC cells were co-cultured at 1:1 (group A). The phenotypes of DC in control group were similar to those in immature DC, while the maturation of DC was significantly inhibited in gene modified group (P0.05). (2) the content of FoxP3 Treg in BMSC / DC group was higher than that in control group. The level of FoxP3 Treg in the gene modified group was higher than that in the control group (P0.05), and the content of FoxP3 Treg in the gene modified group was higher than that in the control group (P 0.05). (3) compared with the control group, the gene modified group was significantly lower than the control group in IL-2, IL-6IFN- 緯 IL-17. The levels of IL-4 and IL-10 increased significantly (P 0.05). Compared with the control group, IL 2 and IL 6 in the gene modified group decreased significantly, while the level of IL 4 hIFN- 緯 increased significantly (P 0 05, P 0 05). (4) the IDO activity in the gene modified group was significantly higher than that in the control group (P 0 05), and there was no significant difference between the two groups in the change of IL-17 and IL 10. (4) the activity of IDO in the gene modified group was significantly higher than that in the control group (P 0. 05). The activity of Ido in group E was significantly higher than that in group A (P 0.05). (5) the expression of Ido mRNA was detected in DC of gene modified group E, but no expression of Ido mRNA was detected in control group. Conclusion the bone marrow mesenchymal stem cells modified with 1: IDO gene can induce immune tolerance through the following four pathways: 1. IDO-BMSC can significantly inhibit the maturation of DC cells. IDO-BMSC can induce the increase of FoxP3 Treg content and the promotion of anti-inflammatory factor by inducing the increase of FoxP3 Treg content. Inhibition of the secretion of proinflammatory factor 4 IDO-BMSC induces DC cells to produce IDO through the bridge of SMC, and then induces immune tolerance.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R392.1

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本文編號(hào)：2074313