本文選題：雌激素受體β + 骨髓間充質(zhì)干細胞　； 參考：《暨南大學》2012年碩士論文

【摘要】：目的通過體外培養(yǎng)C57與ERβ~(-\-)雌性小鼠的BMMSCs，探討其向軟骨細胞分化的潛能；病理學檢查及Mirco CT掃描單側(cè)股骨滑車全層軟骨、軟骨下骨缺損模型，對比觀察缺損軟骨、軟骨下骨修復(fù)過程。 方法體外實驗：采用密度梯度離心結(jié)合差速貼壁培養(yǎng)法分離、擴增兩組小鼠的BMMSCs，流式細胞儀檢測第3代細胞表面抗原標志物CD29、CD44、CD105、CD34、CD45、CD11b；CCK-8法檢測不同時間點的細胞活性，繪制生長曲線；應(yīng)用含軟骨誘導(dǎo)劑（10ng/mLTGF-β1+100nmol/L地塞米松+50ug/mL維生素C）的無血清高糖DMEM培養(yǎng)基，誘導(dǎo)培養(yǎng)第3代BMMSCs21天，免疫組化檢測細胞Ⅱ型膠原表達，RT-PCR檢測細胞Ⅱ型膠原mRNA表達量。體內(nèi)實驗：制作兩組小鼠單側(cè)股骨滑車全層軟骨、軟骨下骨缺損模型，術(shù)后1、2、3、4周取材，病理學檢查及Mirco CT掃描，，對比觀察缺損軟骨、軟骨下骨修復(fù)過程，比較兩組修復(fù)差異。 結(jié)果流式細胞儀檢測表明C57組和ERβ~(-\-)組第3代細胞均高表達CD29、CD44、CD105，低表達CD34、CD45、CD11b，提示體外成功培養(yǎng)BMMSCs細胞；免疫組化證實誘導(dǎo)后的兩組細胞均表達特異性Ⅱ型膠原；C57組和ERβ~(-\-)組向軟骨細胞誘導(dǎo)分化率分別為（56.30±5.25）%和（42.61±6.72）%（P＜0.05）；RT-PCR結(jié)果提示C57組BMMSCs誘導(dǎo)分化的軟骨細胞分泌Ⅱ型膠原mRNA較ERβ~(-\-)組高（43.08±8.73）%（P＜0.05）。Mirco CT掃描顯示兩組模型軟骨下骨缺損缺損區(qū)域在1周內(nèi)即開始出現(xiàn)新骨，4周已骨性愈合；病理學檢查兩組模型顯示，新生透明軟骨參與修復(fù)缺損軟骨區(qū)域。 結(jié)論 1采用密度梯度離心結(jié)合差速貼壁培養(yǎng)法能獲得較純的BMMSCs。 2無血清高糖DMEM培養(yǎng)基中加入10ng/L TGF-β1、100nmol/L地塞米松、50ug/ml維生素C可誘導(dǎo)BMMSCs向軟骨細胞分化。 3缺乏ERβ基因的BMMSCs在體外誘導(dǎo)分化為軟骨細胞的能力減弱，且誘導(dǎo)形成的軟骨細胞分泌Ⅱ型膠原的能力降低。 4在小鼠股骨滑車，d=0.6mm的全層軟骨缺損能自我修復(fù)，修復(fù)組織含透明軟骨細胞。
[Abstract]:Objective to investigate the differentiation potential of BMMSCsfrom C57 and ER 尾 ~ (-\ -) female mice into chondrocytes in vitro. Subchondral bone repair process. Methods: the BMMSCs of the two groups were amplified by density gradient centrifugation and differential adherent culture. Flow cytometry was used to detect the cell surface antigen markers of the 3rd generation. The growth curve was drawn, and the serum-free high glucose DMEM medium containing 10 ng / mLTGF- 尾 1 100nmol / L dexamethasone 50ugr / mL vitamin C was used to induce the third generation of BMMSCs for 21 days. The expression of type 鈪

本文編號：2074296