發(fā)布時(shí)間：2018-06-27 01:06

  本文選題：脂肪源性干細(xì)胞 + SD鼠　； 參考：《大連醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：觀察比較SD大鼠不同部位脂肪源性干細(xì)胞體外培養(yǎng)的增殖能力；探討熒光性染料CM-Dil體外標(biāo)記ADSC的可行性與時(shí)效性。 方法：無菌條件下依次切取SD大鼠腹股溝區(qū)、附睪區(qū)脂肪組織，Ⅰ型膠原酶消化獲取脂肪源性干細(xì)胞，體外行差速貼壁培養(yǎng)傳代。觀察腹股溝區(qū)（A組）與附睪區(qū)（B組）單位體積（1ml）脂肪相同方法下提取的干細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖情況及形態(tài)變化，繪制各自生長(zhǎng)曲線。取匯合至80%的第三代（P3）附睪來源脂肪源性干細(xì)胞，分為實(shí)驗(yàn)組（a、b、c組）和對(duì)照組（d組）。各實(shí)驗(yàn)組使用不同濃度的CM-Dil標(biāo)記液體外標(biāo)記ADSC，分別為a組（20μg/ml）、b組（30μg/ml）、c組（40μg/ml）。空白對(duì)照組（d組）無CM-Dil標(biāo)記及其他特殊處理，體外行差速貼壁培養(yǎng)并傳代。觀察并比較兩組細(xì)胞形態(tài)，繪制各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，計(jì)算a、b、c三組細(xì)胞24小時(shí)的標(biāo)記率，分析此標(biāo)記方法的可行性。觀察期限25天，計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)a、b、c組細(xì)胞的標(biāo)記率，組組間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，探討其時(shí)效性。 結(jié)果：①在倒置相差顯微鏡下觀察，，A、B兩組脂肪源性干細(xì)胞均呈短小梭形，隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞逐漸變得細(xì)長(zhǎng)，兩者的細(xì)胞形態(tài)均與成纖維細(xì)胞相似；②同樣消化方法下獲取的A組（腹股溝區(qū)）細(xì)胞數(shù)量為（1.03士0.19）×10~3個(gè)，B組(附睪區(qū))細(xì)胞數(shù)量為（2.08士0.15）×10~3，兩者存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；③A、B兩組ADSC的生長(zhǎng)曲線均呈“S”形，B組（附睪區(qū)）ADSC的的增殖能力高于A組（腹股溝區(qū)）；④不同濃度CM-Dil標(biāo)記液（a組：20μg/ml、b組：30μg/ml、c組：40μg/ml）24h的標(biāo)記率分別為：（98.16士0.31）%、（98.93士0.77）%、（98.09士0.50）%，組組間無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）；⑤實(shí)驗(yàn)組（20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml）與對(duì)照組的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線均呈“S”形，其中20μg/ml和30μg/ml的標(biāo)記濃度對(duì)細(xì)胞的增殖能力及活力無明顯影響。⑥細(xì)胞傳至第8代（25d）時(shí)，c組（40μg/ml）的陽性標(biāo)記率仍可達(dá)到（74.37士1.68）%，與a組（20μg/ml）標(biāo)記率（67.59士2.53%）存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。 結(jié)論： 1、大鼠附睪區(qū)脂肪組織所含ADSC在獲取數(shù)量、細(xì)胞活力、體外增殖能力方面要優(yōu)于腹股溝區(qū)ADSC，可作為種子細(xì)胞來源的理想供區(qū)。 2、采用CM-Dil對(duì)ADSC進(jìn)行體外標(biāo)記具有可行性，20μg/ml、30μg/ml的標(biāo)記濃度對(duì)細(xì)胞的增殖能力及活力無明顯影響。 3、不同濃度CM-Dil在短期內(nèi)對(duì)ADSC的標(biāo)記率無明顯影響，40μg/ml濃度可維持在3周以上。
[Abstract]:Aim: to observe and compare the proliferative ability of adipose derived stem cells from different parts of SD rats in vitro and to explore the feasibility and timeliness of labeling ADSC with fluorescent dye CM-Dil in vitro. Methods: adipose-derived stem cells were obtained by digesting adipose tissue in inguinal and epididymal regions of SD rats under aseptic condition. The adipose-derived stem cells were obtained by collagenase 鈪

本文編號(hào)：2072084