發(fā)布時間：2018-06-13 13:44

  本文選題：NSCs + 新生SD大鼠��； 參考：《河北大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：神經(jīng)干細胞(neural stem cells, NSCs)的發(fā)現(xiàn)是在研究造血發(fā)生和神經(jīng)發(fā)育的基礎(chǔ)上開始的。研究結(jié)果顯示，胚胎和成人腦組織中均存在NSCs。它強大的增殖能力使得NSCs易于在體外大量繁殖，在體內(nèi)移植時常常具有低免疫原性，因此在臨床治療中具有廣闊的應(yīng)用前景。 本文選擇的實驗材料為新生SD (sprague-dawley)大鼠，首先探討了NSCs的體外分離、培養(yǎng)及鑒定的方法。無菌條件下分離出大鼠的海馬組織，采用無血清培養(yǎng)法進行培養(yǎng)。研究結(jié)果表明，以5×10~5個/mL的細胞密度接種到培養(yǎng)瓶中，傳代后的細胞生長穩(wěn)定，經(jīng)免疫熒光鑒定均為Nestin陽性。建立了一種快速獲得NSCs的體外培養(yǎng)及鑒定系統(tǒng)。 在此基礎(chǔ)上，，以DMEM/F12培養(yǎng)基、二甲基亞砜DMSO、胎牛血清FBS作為主要成分，設(shè)計了不同配比的凍存保護液，對NSCs冷凍保存進行了研究。分別凍存1周、2周及1個月后臺盼藍染色檢測其復(fù)蘇率，結(jié)果顯示D10組(70%DMEM/F12+20%FBS+10%DMSO)作為凍存保護液，復(fù)蘇率分別為(54.00±1.73)%，(59.00±1.16)%，(58.00±2.08)%，顯著優(yōu)于其余各組，且復(fù)蘇后不影響其原有的生物學(xué)特性。 此外，本文還對NSCs誘導(dǎo)分化后不同天數(shù)的鉀通道的變化進行了研究。將培養(yǎng)的第3代NSCs進行誘導(dǎo)分化，對NSCs以及誘導(dǎo)分化后的神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞進行免疫熒光鑒定，并用全細胞膜片鉗記錄其分化5d,10d,15d,20d鉀電流的變化。研究結(jié)果表明，去除生長因子后在培養(yǎng)液中添加10%FBS將NSCs誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞，經(jīng)NSE和GFAP檢測均為陽性；膜片鉗記錄到的鉀電流隨著分化天數(shù)的延長而不斷增高，說明誘導(dǎo)后的神經(jīng)元在電生理功能上逐漸發(fā)育成熟。
[Abstract]:The discovery of neural stem cells (NSCs) is based on the study of hematopoiesis and neural development. The results showed that NSCs were present in both embryonic and adult brain tissues. Because of its strong proliferative ability NSCs are easy to proliferate in vitro and have low immunogenicity when transplanted in vivo. Therefore NSCs have a broad application prospect in clinical treatment. The experimental materials selected in this paper were neonatal SD sprague-dawley rats. The methods of isolation, culture and identification of NSCs in vitro were studied. Rat hippocampal tissue was isolated under aseptic condition and cultured by serum-free culture. The results showed that the cells inoculated with 5 脳 10 ~ 5 / mL cell density in the culture flask had stable growth and were identified as nestin positive by immunofluorescence. An in vitro culture and identification system of NSCs was established. On this basis, DMEM / F12 medium, DMSO-dimethyl sulfoxide and FBS of fetal bovine serum were used as the main components to design different ratio of frozen preservation solution, and the cryopreservation of NSCs was studied. The rate of resuscitation was detected by backstage trypan blue staining for 1 week, 2 weeks and 1 month respectively. The results showed that the recovery rate of D10 group was 54.00 鹵1.73 + 59.00 鹵1.16 + 58.00 鹵2.080.The recovery rate of D10 group was 54.00 鹵1.73 + 1.16%, and the original biological characteristics were not affected after resuscitation. In addition, the changes of potassium channels in different days after induction and differentiation of NSCs were studied. The third generation of cultured NSCs were induced to differentiate. The NSCs and the differentiated neurons and astrocytes were identified by immunofluorescence, and the changes of potassium currents were recorded by whole-cell patch clamp for 5 days, 10 days, 15 days and 20 days after differentiation. The results showed that NSCs were induced to differentiate into neurons and astrocytes by adding 10s to the culture medium after the removal of growth factors. Both NSE and GFAP were positive. The potassium currents recorded by patch clamp increased with the prolongation of differentiation days, indicating that the induced neurons developed and matured in electrophysiological function.
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R329

【共引文獻】

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本文編號：2014217