本文選題：HIV-1 + 中和抗體　； 參考：《南京醫(yī)科大學(xué)》2011年博士論文

【摘要】：人類(lèi)免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)是艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome, AIDS)的病原體。據(jù)中國(guó)衛(wèi)生部通報(bào)顯示,截至2010年10月底,累計(jì)報(bào)告艾滋病病毒感染者和病人370393例,其中病人132440例;死亡68315例。雖然上升幅度有所減緩,但是艾滋病疫情持續(xù)上升;而且局部地區(qū)和特定人群疫情嚴(yán)重1。疫苗在傳染性疾病的控制中已被證明是行之有效的方法。HIV-1廣譜中和抗體(broadly neutralizing antibodies, bNAbs)不僅可以延緩病情進(jìn)展也可以預(yù)防病毒感染。HIV-1疫苗尚不能在人體誘導(dǎo)高水平的廣譜中和抗體。 在HIV-1自然感染早期,患者體內(nèi)可產(chǎn)生包膜蛋白特異性抗體,中和敏感株,但是不能中和臨床分離株。隨著感染的持續(xù),部分HIV-1患者(10%~30%)的血清能夠廣泛中和不同遺傳背景的臨床分離株,含有bNAbs。中國(guó)HIV-1優(yōu)勢(shì)亞型(95%以上)為B’(或者Thai B)亞型、BC重組亞型和AE重組亞型。B’亞型主要流行區(qū)是河南和河北,AE和BC重組體主要流行區(qū)是廣西和云南及新疆,BC重組體也流行于四川省。不同亞型或者重組體的HIV-1生物學(xué)特征并不一致,凸顯了研究中國(guó)HIV-1流行病毒株誘導(dǎo)的免疫血清的重要性。 課題首先鑒定、保存和提取了60株HIV-1包膜蛋白表達(dá)質(zhì)粒(Env),應(yīng)用骨架質(zhì)粒pSG3△Env和包膜蛋白質(zhì)粒Env共同轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,制備了46株HIV-1假型病毒,來(lái)自AE、B、B’、BC和C等5個(gè)clade/CRF,包含了國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)株和中國(guó)流行株。應(yīng)用單克隆抗體b12、2G12、2F5和4E10檢測(cè)了HIV-1病毒株的中和敏感性,結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致,提示假型病毒制備成功。 進(jìn)而,課題應(yīng)用46株假型病毒篩選了39份中國(guó)HIV-1感染者血清,結(jié)果顯示:(1)17份血清無(wú)中和活性或僅能中和敏感株;(2)8份血清能中和1個(gè)clade/CRF的病毒株;(3)14份血清能夠中和2個(gè)以上clade/CRF的病毒株;(4)患者血清的中和和活性與患者的HIV-1包膜的基因型有關(guān)聯(lián);(5)患者血清的中和活性與患者的感染時(shí)間呈正相關(guān)。 應(yīng)用V3肽段吸附試驗(yàn)和b12等單克隆抗體進(jìn)行的病毒捕獲競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)表明:(1)V3肽段吸附可以降低部分患者血清的中和活性;(2)血清的廣譜中和活性可能不是V3抗體介導(dǎo)的;(3)CD4bs抗體可能介導(dǎo)了血清的廣譜中和活性;(4)患者血清中的CD4bs抗體并不總是具備廣譜中和活性;(5)患者血清中的CD4bs抗體可能包含了新近分離的VRC01和VRC03等抗體(;6)只有患者NJ019的血清中可能含有2G12抗體。 最后,課題應(yīng)用編碼中國(guó)BC重組體gp120共有序列的DNA疫苗和蛋白質(zhì)疫苗,通過(guò)DNA初免和蛋白質(zhì)疫苗加強(qiáng)(DNA prime + protein boost)策略接種新西蘭白兔,考察其誘導(dǎo)的動(dòng)物免疫血清的中和活性,結(jié)果顯示:(1)成功制備了編碼中國(guó)BC重組體gp120共有序列的DNA疫苗和蛋白質(zhì)疫苗;(2)與gp120蛋白單獨(dú)免疫組(protein alone)比較,gp120核酸疫苗初免后gp120蛋白疫苗加強(qiáng)免疫(DNA + protein)可以獲得更高水平的gp120特異性抗體;(3)protein alone或者DNA + Protein免疫血清都可以中和表達(dá)疫苗序列的假型病毒株以及中和敏感株SF162;(4)V3肽段吸附可以顯著降低免疫血清對(duì)表達(dá)疫苗序列的假型病毒株以及SF162的中和活性;(5)僅有DNA + Protein免疫血清可以中和BC臨床分離株;(6)除了能中和B’亞型的HN24之外,DNA + Protein免疫血清不能中和來(lái)自其他亞型的臨床分離株;(7)V3肽段吸附不能降低DNA + Protein免疫血清對(duì)BC臨床分離株和HN24的中和活性;(8)病毒捕獲競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)表明,DNA + Protein免疫血清的中和活性可能由CD4bs抗體介導(dǎo),如b12,但是可能不含有VRC01或者VRC03;(9)動(dòng)物免疫血清中可能不含有2G12抗體。 研究中國(guó)HIV-1患者的bNAbs以及中國(guó)HIV-1包膜蛋白共有序列疫苗具有重要的理論意義和現(xiàn)實(shí)意義:(1)對(duì)bNAbs產(chǎn)生規(guī)律的解析有助于理解HIV-1與宿主的相互作用;(2)對(duì)bNAbs識(shí)別的廣譜中和表位的理解有助于改進(jìn)設(shè)計(jì)免疫原;(3)HIV-1包膜蛋白共有序列降低了疫苗與臨床分離株的遺傳距離,是誘導(dǎo)廣譜中和抗體的有效途徑之一。
[Abstract]:浜虹被鍏嶇柅緙洪櫡鐥呮瘨(human immunodeficiency virus, HIV)鏄壘婊嬬梾(acquired immunodeficiency syndrome, AIDS)鐨勭梾鍘熶綋.鎹腑鍥藉崼鐢熼儴閫氭姤鏄劇ず,鎴嚦2010騫，

本文編號(hào)：1981069