本文選題：人 + 腸道細(xì)菌��； 參考：《東北農(nóng)業(yè)大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：大豆異黃酮(Soybean isoflavones)是存在于豆科植物體內(nèi)的一種植物雌激素,其主要苷元成分大豆苷元和染料木素具有廣泛的生物學(xué)活性。流行病學(xué)研究表明大豆異黃酮具有預(yù)防乳腺癌、前列腺癌、心血管疾病、骨質(zhì)疏松以及緩解婦女更年期等癥狀等生物活性。近年來,隨著研究的深入,發(fā)現(xiàn)大豆異黃酮在腸道中代謝產(chǎn)生的雌馬酚(equol)具有比大豆異黃酮更高的生物活性,性質(zhì)更穩(wěn)定,更易被人體吸收,在血漿中的清除速度也更慢,所以推測大豆異黃酮的生物學(xué)作用在一定程度上可能歸因于雌馬酚,但僅有30%-50%的人能將大豆異黃酮代謝為雌馬酚。由于雌馬酚只能由腸道微生物特異性產(chǎn)生,并且雌馬酚的生物學(xué)作用和對人群的適用性要優(yōu)于大豆異黃酮,因此分離出產(chǎn)雌馬酚的菌種,為將來用微生物技術(shù)方法制備雌馬酚具有非常廣泛的應(yīng)用前景。國外有關(guān)大豆黃酮降解菌的研究多集中在人和小鼠上,分離獲得的腸道內(nèi)大豆黃酮降解菌也只有少數(shù)幾種,國內(nèi)未見從人體內(nèi)分離出產(chǎn)雌馬酚菌的報(bào)道。本研究從人體尿樣中篩選出雌馬酚產(chǎn)生者,采用選擇性培養(yǎng)基,從雌馬酚產(chǎn)生者的糞樣中,分離純化并鑒定出兩株能代謝大豆苷元產(chǎn)生雌馬酚的細(xì)菌菌株,并對其菌株的性質(zhì)作了一定探索。 本文首先采用HPLC檢測人體尿樣中的雌馬酚。對HPLC的色譜條件進(jìn)行優(yōu)化,使用C18柱,流動(dòng)相為乙腈：甲醇：水=20：30：50(V/V),流速為1mL/min,雌馬酚檢測波長為205nm,柱溫為25℃。并對檢測方法進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果顯示：雌馬酚的濃度為0.1-25μg/mL,A與C呈良好的線性關(guān)系,其線性回歸方程為：A=103170C-10178(R2=0.999)。儀器精密度試驗(yàn)其雌馬酚相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.8%。穩(wěn)定性試驗(yàn)其雌馬酚RSD為1.24%。方法精密度試驗(yàn)其雌馬酚RSD為1.32%。樣品的平均回收率為99.72%,RSD為0.13%。12名受試者中,4名是雌馬酚產(chǎn)生者。 在產(chǎn)雌馬酚細(xì)菌的分離中,采用BHI培養(yǎng)基,加入200μmol/L的大豆苷元作為底物,在厭氧環(huán)境中對雌馬酚產(chǎn)生者的糞樣進(jìn)行分離培養(yǎng)、純化獲得56株細(xì)菌,應(yīng)用己建立的HPLC分析檢測培養(yǎng)液中代謝終產(chǎn)物雌馬酚含量,經(jīng)多次分離純化得到2個(gè)菌株HY-1和HY-2可以產(chǎn)生雌馬酚,其產(chǎn)生的雌馬酚濃度分別為0.26μg/mL和0.36μg/mL。經(jīng)細(xì)菌生理生化鑒定及16S rDNA序列分析可知,菌株HY-1為兼性厭氧菌,判斷為腸球菌屬。菌株HY-2為嚴(yán)格厭氧菌,判斷為Slackia屬。菌株HY-1的16S rDNA序列與Enterococcus faecium同源性為99%。菌株HY-2的16S rDNA序列與Slackia isoflavoniconvertens同源性超過99%。兩株細(xì)菌在NCBI的GenBank中登陸號分別為JQ768054和JQ796697。 對得到的兩個(gè)菌株的性質(zhì)分別進(jìn)行了研究,通過檢測菌株的生長曲線表明,菌株HY-1接種后10h內(nèi)為細(xì)菌的快速生長期,18h后進(jìn)入衰亡期。菌株HY-2接種后10h內(nèi)為細(xì)菌的快速生長期,14h后進(jìn)入衰亡期。在菌株培養(yǎng)過程中測定培養(yǎng)基的pH變化情況,菌株HY-1在BHI-大豆苷元培養(yǎng)基中0-6h內(nèi)pH值下降較快,在6h時(shí)達(dá)到最低值6.27,之后有回升,48h培養(yǎng)結(jié)束后時(shí)回升到6.51。菌株HY-2在BHI-大豆苷元培養(yǎng)基中0-8h內(nèi)pH下降平緩,在8h時(shí)達(dá)到最低值6.72,之后回升,48h培養(yǎng)結(jié)束后時(shí)回升到6.83。在溫度30-40℃范圍內(nèi)菌株HY-1和HY-2生長較好,屬于中溫微生物,其中30-35℃為最佳生長溫度區(qū)間,過高或過低都不利于菌的生長。不同碳源對菌株HY-I和HY-2產(chǎn)雌馬酚的影響不同。葡萄糖、麥芽糖、乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖和甘露糖促進(jìn)菌株HY-1產(chǎn)雌馬酚,木糖和山梨醇抑制雌馬酚的產(chǎn)生。葡萄糖、木糖、鼠李糖、阿拉伯糖、山梨醇促進(jìn)菌株HY-2產(chǎn)雌馬酚,麥芽糖和乳糖抑制雌馬酚的產(chǎn)生。
[Abstract]:Soybean isoflavone ( soybean isoflavone ) is a kind of phytoestrogen present in the body of Leguminosae , its main glycoside component is daidzin and genistein has extensive biological activity . In recent years , it has been found that soybean isoflavone has higher biological activity than soybean isoflavone .

The results showed that the relative standard deviation ( RSD ) of equol was 0 . 1 - 25 渭g / mL , and the average recovery rate was 99.72 % , RSD was 0 . 13 % . Among 12 subjects , 4 were equol .

Strain HY - 1 and HY - 2 were isolated and purified to obtain 56 strains . The results showed that HY - 1 and HY - 2 could produce equol . The results showed that HY - 1 and HY - 2 strain HY - 1 had 99 % identity . The 16S rDNA sequence of strain HY - 2 was more than 99 % . The accession number of strain HY - 2 was JQ768054 and JQ796697 , respectively .

The strains HY - 1 and HY - 2 were cultured in medium temperature range of 30 - 35 鈩，

本文編號：1980808