本文選題：甘露糖凝集素相關(guān)絲氨酸蛋白酶- + 同源重組��； 參考：《中國生物制品學(xué)雜志》2016年11期

【摘要】：目的利用p Yr-adshuttle-4質(zhì)粒構(gòu)建重組腺病毒載體p Ad-4-h MASP-2。方法應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增甘露糖凝集素相關(guān)絲氨酸蛋白酶-2(human mannan-binding lectin associated serine protease-2,h MASP-2)基因,經(jīng)Bam HⅠ和Eco RⅠ雙酶切后與p Yr-adshuttle-4質(zhì)粒連接,構(gòu)建穿梭質(zhì)粒p Yr-ads-4-h MASP-2,在LR酶作用下與腺病毒骨架載體p Ad/PL-DEST進(jìn)行體外同源重組,獲得重組腺病毒載體p Ad-4-h MASP-2,轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,獲得重組腺病毒r Adh MASP-2,應(yīng)用酶切、PCR擴(kuò)增及基因測序進(jìn)行鑒定,并測定病毒滴度。將r Ad-h MASP-2感染小鼠,實(shí)時熒光定量PCR法檢測h MASP-2基因m RNA在小鼠肺組織中的表達(dá)。結(jié)果重組穿梭質(zhì)粒p Yr-ads-4-h MASP-2經(jīng)雙酶切及測序證實(shí)構(gòu)建正確,通過同源重組獲得了重組腺病毒載體p Ad-4-h MASP-2,擴(kuò)增出滴度為1.5×109 PFU/ml的重組腺病毒顆粒r Ad-h MASP-2,其能在小鼠肺組織中表達(dá)。結(jié)論成功獲得重組腺病毒載體p Ad-4-h MASP-2和重組腺病毒顆粒r Ad-h MASP-2,為體內(nèi)外研究h MASP-2的活性提供了有效的轉(zhuǎn)基因載體。
[Abstract]:Objective to construct recombinant adenovirus vector p Ad-4-h MASP-2 using p Yr-adshuttle-4 plasmid. Methods the Mannose lectin associated serine protease-2human mannan-binding lectin associated serine protease-2hMASP-2) gene was amplified by PCR. The gene was digested by Bam H 鈪，

本文編號：1948659