本文選題：EGFRvⅢ + ELISA　； 參考：《生物技術(shù)》2017年04期

【摘要】：[目的]以合成抗原EGFRvⅢ-BSA作為被檢測物,建立檢測抗EGFRvⅢ單鏈抗體的間接ELISA檢測方法并優(yōu)化其反應(yīng)條件。[方法]利用N-馬來酰亞胺甲基環(huán)己烷-1-羧酸琥珀酰亞胺酯(SMCC)將EGFRvⅢ與BSA偶聯(lián)制備抗原。利用方陣滴定法對間接ELISA法的抗原包被濃度,單鏈抗體的稀釋度、包被時間和溫度、包被液、抗His-tag多抗稀釋度和酶標抗體的稀釋度進行優(yōu)化,并對建立的間接ELISA方法的方法學(xué)進行驗證。[結(jié)果]通過SDS-PAGE電泳和全波長紫外掃面顯示EGFRvⅢ-BSA合成成功。用PBS于37℃包被1.25μg/m L的EGFRvⅢ-BSA 2 h,加入19.044μg/L的ChiMR1、1∶8 000的兔抗His-tag多抗和1∶10 000酶標抗體可獲得最佳ELISA檢測結(jié)果。應(yīng)用優(yōu)化后的條件檢測4.761~152.35μg/L范圍內(nèi)的ChiMR1顯示線性良好。線性方程為y=(A-D)/[1+(x/C)^B]+D(A:1.99706;B:-1.09760;C:35.54885;D:0.01558),R2=0.99923;60μg/L和20μg/L的質(zhì)控品的檢測精密度分別為7.142%和4.828%;準確度分別為91.8%和82.90%,準確度和精密度良好。[結(jié)論]建立的間接ELISA方法的線性、準確度和精密度良好,為臨床疾病的檢測奠定良好基礎(chǔ)。
[Abstract]:[objective] to establish an indirect ELISA method for detection of anti EGFRv 鈪，

本文編號：1843529