本文選題：醛固酮 + Toll樣受體4　； 參考：《中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院》2011年博士論文

【摘要】：背景和目的： 醛固酮,作為腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的一個主要成員,負責調(diào)控腎臟、結(jié)腸的離子轉(zhuǎn)運,維持水、電解質(zhì)的平衡。許多研究發(fā)現(xiàn),在嚴重應(yīng)激病人的體內(nèi)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)被明顯激活,血清中醛固酮的水平也明顯升高。長久以來,人們認為醛固酮可促進高血壓和心肌纖維化的發(fā)生,通過促進心肌成纖維細胞增殖和膠原的合成,導致心肌重構(gòu)和心肌功能低下。醛固酮可發(fā)揮經(jīng)典的基因組作用,通過與細胞內(nèi)鹽皮質(zhì)激素受體結(jié)合,進而影響靶蛋白的轉(zhuǎn)錄和合成。但是,研究發(fā)現(xiàn),醛固酮也可通過與細胞膜受體結(jié)合發(fā)揮非基因組作用,主要特點是作用迅速(數(shù)分鐘內(nèi)),不被ALD受體拮抗劑螺內(nèi)酯所抑制,也有證據(jù)顯示有些非基因作用方式是由MR介導的,能夠部分被螺內(nèi)酯所抑制。Toll樣受體廣泛存在于天然免疫細胞膜上,是感知外源性或內(nèi)源性損傷物質(zhì)的“哨兵”。應(yīng)激后,組織受到損傷,細胞應(yīng)激或者降解導致某些物質(zhì)釋放或者分泌,與Toll樣受體4結(jié)合后介導一系列的炎性反應(yīng)。Toll樣受體4可識別一系列的內(nèi)源性識別分子,如高遷移率簇蛋白,透明質(zhì)烷片段,熱休克蛋白,硫酸乙酰肝素和纖維蛋白原等。研究發(fā)現(xiàn)嚴重應(yīng)激后常引起腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)興奮,并伴以不同程度的血管緊張素、醛固酮水平上調(diào)等,它們可能在一定程度上影響免疫功能。本研究探討應(yīng)激后機體神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)對免疫識別受體-Toll樣受體4信號通路的影響,研究醛固酮調(diào)控THP-1細胞分泌IL-8的作用與機制,證實醛固酮通過Toll樣受體4調(diào)控機體的免疫應(yīng)答。 方法： 本實驗利用藥物干預(yù)的方法模擬體內(nèi)應(yīng)激狀態(tài)模型,通過酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)動態(tài)檢測細胞培養(yǎng)上清IL-8的分泌量,確定藥物干預(yù)的最佳劑量和最佳作用時間,并通過實時熒光定量PCR(polymerase chain reaction)方法觀察在給予拮抗劑治療下,IL-8的mRNA的改變和受體表達的變化,進一步研究醛固酮在應(yīng)激狀態(tài)下調(diào)控IL-8分泌的信號傳導通路及各信號通路之間的相互作用,同時研究醛固酮受體拮抗劑-螺內(nèi)酯和Toll樣受體4單克隆抗體的干預(yù)效果。計量資料以均數(shù)士標準差(x±s)表示,采用CHISS2007軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析(analysis of variance, ANOVA),組間兩兩比較采用SNK-q(student-newman-keuls,SNK-q)檢驗,P0.05表示有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果： 實時熒光定量PCR和免疫細胞熒光結(jié)果顯示,人單核巨噬細胞THP-1有鹽皮質(zhì)激素受體和Toll樣受體表達。將四個劑量的醛固酮(10nM,102nM、103nM和104nM)與THP-1細胞共孵育5min、30min、2h、6h和12h,以ELISA方法發(fā)現(xiàn)醛固酮在2h后可明顯上調(diào)THP-1細胞IL-8的分泌,四個劑量分別為對照組的1.11,2.28,1.63和1.68倍,并隨時間逐漸增高,12h達到高峰；PCR結(jié)果顯示醛固酮與THP-1細胞共孵育30min后,THP-1細胞IL-8 mRNA的表達為對照組的4.47倍,12h達到高峰。102nM的醛固酮與THP-1細胞孵育12h后,應(yīng)用終濃度為10μg/μl的TLR4單克隆抗體和10-6M的螺內(nèi)酯進行干預(yù),其對IL-8 mRNA的表達量均明顯降低(P0.05)且TLR4單克隆抗體和螺內(nèi)酯同時作用,對阻斷IL-8的分泌和合成具有協(xié)同作用。 結(jié)論： 人單核-巨噬細胞THP-1存在鹽皮質(zhì)激素受體MR和Toll樣受體4(TLR4)。醛固酮可呈時間依賴性增加THP-1細胞的IL-8分泌,且這種上調(diào)IL-8分泌的作用不是通過非基因組途徑,而是通過經(jīng)典的MR受體介導的,且可被MR的特異性受體拮抗劑螺內(nèi)酯阻斷。醛固酮刺激THP-1細胞分泌IL-8,也可被TLR4的單克隆抗體部分阻斷。螺內(nèi)酯和TLR4的單克隆抗體對于ALD刺激THP-1細胞分泌IL-8的阻斷具有協(xié)同作用。醛固酮可以通過上調(diào)TLR4受體的蛋白表達水平,參與對機體的免疫調(diào)控機制。
[Abstract]:Background and Purpose :


Toll - like receptor 4 can play an important role in the pathogenesis of hypertension and myocardial fibrosis .


Method :


The effects of aldosterone receptor antagonist - spirolactone and Toll - like receptor 4 monoclonal antibody were studied by means of real - time fluorescence quantitative polymerase chain reaction ( CHISS2007 ) .


Results :


Four doses of aldosterone ( 10 nM , 102 nM , 103 nM and 104 nM ) were incubated with THP - 1 cells for 5 min , 30 min , 2 h , 6 h and 12 h . Four doses of aldosterone ( 10 nM , 102 nM , 103 nM and 104 nM ) were incubated with THP - 1 cells for 5 min , 30 min , 2 h , 6 h and 12 h .
After 30 min incubation with THP - 1 cells , the expression of IL - 8 mRNA in THP - 1 cells was 4.47 times and peaked at 12 h . After 12 hours of incubation with THP - 1 cells , the expression of IL - 8 mRNA decreased significantly ( P0.05 ) .


Conclusion :


Aldosterone stimulates the secretion of IL - 8 in THP - 1 cells in a time - dependent manner .

【學位授予單位】：中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R392.3

【參考文獻】

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本文編號：1843480