本文選題：干擾素gamma受體 + STAT1　； 參考：《浙江理工大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄翻譯后修飾在生命活動(dòng)中扮演著重要的角色，如磷酸化、乙酰化、甲基化和泛素化等。乙�；梢哉{(diào)節(jié)組蛋白和非組蛋白的活性。最近又有文章報(bào)道乙�；梢哉{(diào)節(jié)代謝循環(huán)中相關(guān)酶的活性。現(xiàn)在乙�；揎椧呀�(jīng)成為了研究的熱點(diǎn)。雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了很多蛋白質(zhì)的乙酰化修飾，但有關(guān)二型干擾素受體（IFNgR）的乙酰化修飾的研究卻很少。本課題主要從兩方面研究乙酰化在IFNgR介導(dǎo)的信號(hào)通路中的作用。一方面，我們研究IFNgR是否會(huì)發(fā)生乙�；约耙阴；瘜�(duì)其功能的影響。另一方面，我們研究STAT1新的乙�；稽c(diǎn)以及這些新位點(diǎn)對(duì)其功能的影響。 IFNgR乙�；揎椃矫妫覀儤�(gòu)建了能夠表達(dá)IFNgR1Full Lengt（hIFNgR1FL）、IFNgR1Cytoplasmic Domain（IFNgR1CD）、IFNgR2FL和IFNgR2CD的質(zhì)粒，同時(shí)也構(gòu)建了一系列IFNgR1CD的點(diǎn)突變體和截?cái)囿w。然后經(jīng)IP和Western blot等方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：在CBP的作用下IFNgR1FL、IFNgR1CD和IFNgR2FL會(huì)發(fā)生明顯的乙酰化修飾，而IFNgR2CD基本檢測(cè)不到乙酰化修飾。我們已經(jīng)送出乙�；疘FNgR1FL和IFNgR2FL的蛋白樣品，用于質(zhì)譜分析。對(duì)于IFNgR1CD突變體的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，K~(271,272)、K~(303)、K~(459)和K~(473)是IFNgR1CD發(fā)生乙�；年P(guān)鍵位點(diǎn)。 STAT1乙�；揎椃矫妫覀冇肐P和Western blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)內(nèi)源的STAT1在IFN-γ的誘導(dǎo)下會(huì)發(fā)生乙�；毁|(zhì)譜的結(jié)果顯示我們發(fā)現(xiàn)了STAT1新的乙�；稽c(diǎn)（K~(193)和K~(697)），STAT1的K193R和K697R突變體的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了這兩個(gè)位點(diǎn)是STAT1發(fā)生乙�；年P(guān)鍵位點(diǎn)；Western blot和熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)顯示K~(193)和K~(697)的乙酰化修飾不影響STAT1同源二聚體的形成并且對(duì)STAT1的轉(zhuǎn)錄活性的影響不如Y701那樣顯著。 本課題還將進(jìn)一步深入研究，希望為乙�；揎椀难芯砍鲆环萘Α� 溶瘤腺病毒Ad.sp-E1A(△24)-IL-24對(duì)人肝癌細(xì)胞株P(guān)LC的作用機(jī)制尚不清楚。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)PLC經(jīng)PBS、Ad.sp-E1A(△24)以及Ad.sp-E1A(△24)-IL-24處理48h后細(xì)胞周期的變化；利用Western blot檢測(cè)PLC經(jīng)PBS、Ad.sp-E1A(△24)以及Ad.sp-E1A(△24)-IL-24處理24h、48h后細(xì)胞中凋亡信號(hào)相關(guān)蛋白表達(dá)量的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：Ad.sp-E1A(△24)和Ad.sp-E1A(△24)-IL-24能將PLC細(xì)胞周期阻滯在S期，S期比值分別為(43.74±6.61)%，(49.48±7.60)%，兩者與未感染病毒的對(duì)照組(18.91±1.83)%進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)差異分析，P值均0.05；同時(shí)，Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)隨著處理時(shí)間的增加，病毒處理組中CHOP的表達(dá)量，Caspase12的剪切水平及STAT3、p38MAPK的磷酸化水平都有明顯提高，尤其以Ad.sp-E1A(△24)-IL-24處理組相對(duì)較為明顯，，SOCS3的表達(dá)量病毒處理組與對(duì)照組均沒(méi)有顯著差異。上述結(jié)果表明：溶瘤腺病毒Ad.sp-E1A(△24)-IL-24能有效阻滯PLC細(xì)胞周期在S期，并可能通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力、STAT3與MAPK信號(hào)通路等多種途徑誘發(fā)PLC細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:Posttranslational modification of proteins plays an important role in life activities, such as phosphorylation, acetylation, methylation and ubiquitin. Acetylation regulates the activity of histone and non-histone. Recently, it has been reported that acetylation can regulate the activity of enzymes in metabolic cycle. Now acetylation modification has become a hot topic. Although many protein acetylation modifications have been found, few studies have been conducted on the acetylation modification of IFNgR- type 2 interferon receptor (IFNgR). This study focuses on the role of acetylation in IFNgR-mediated signaling pathways. On the one hand, we study whether acetylation occurs in IFNgR and the effect of acetylation on its function. On the other hand, we study the new acetylation sites of STAT1 and their effects on its function. In the aspect of IFNgR acetylation modification, we constructed a series of IFNgR1CD point mutants and truncates, which can express IFNgR1Full engtr hIFNgR1FL1, IFNgR1Cytoplasmic domain, IFNgR1CDFL and IFNgR2CD. Then by IP and Western blot, it was found that IFNgR1FLFL-IFNgR1CD and IFNgR2FL had obvious acetylation modification under the action of CBP, but IFNgR2CD could not detect acetylation modification. We have sent out protein samples of acetylated IFNgR1FL and IFNgR2FL for mass spectrometry. For the IFNgR1CD mutants, it was found that the key sites for acetylation of IFNgR1CD were KG271272KC303KH459 and KP473). In the aspect of STAT1 acetylation modification, we used IP and Western blot experiments to find that endogenous STAT1 would be acetylated under the induction of IFN- 緯. The results of mass spectrometry show that we have found a new acetylated site of STAT1 and the K193R and K697R mutants of KG697T1and K697R, which further confirm that these two sites are the key sites for acetylation of STAT1. Western blot and luciferase reporter gene detection. The results showed that the acetylation modification of STAT1 and KG697) did not affect the formation of STAT1 homopolymer and the effect on the transcriptional activity of STAT1 was not as significant as that of Y701. This subject will be further studied, hoping to provide a contribution to the study of acetylation modification. The mechanism of adenolytic adenovirus Ad.sp-E1A (24)-IL-24) on human hepatoma cell line PLC is unclear. Flow cytometry was used to detect the cell cycle changes of PLC treated with 24)-IL-24 and Ad.sp-E1A (24) and Ad.sp-E1A (24)-IL-24) for 48h, and Western blot was used to detect the expression of apoptosis-related proteins in PLC treated with PLC for 24 h and Ad.sp-E1A (24)-IL-24) for 48 h. The results showed that the ratio of 24)-IL-24 to Ad.sp-E1A (24) and Ad.sp-E1A (24)-IL-24) was 43.74 鹵6.61% and 49.48 鹵7.60%, respectively. The expression of Caspase12 and phosphorylation of STAT3 p38 MAPK were significantly increased in virus treated group, especially in Ad.sp-E1A (24)-IL-24 treatment group). There was no significant difference between virus treatment group and control group. These results suggest that Ad.sp-E1A (24)-IL-24) can effectively block the cell cycle of PLC in S phase and induce apoptosis of PLC cells through various pathways such as endoplasmic reticulum pressure STAT3 and MAPK signaling pathway.
【學(xué)位授予單位】：浙江理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R3411

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1836161