發(fā)布時(shí)間：2018-04-21 04:24

  本文選題：多孔CPC材料 + BMSCs　； 參考：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：背景:大段骨缺損的修復(fù)一直是臨床上所面臨的難題,骨組織工程的研究和發(fā)展為大段骨缺損的修復(fù)提供了一條良好的途徑,相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道利用支架材料復(fù)合生長因子以及種子細(xì)胞配合適宜的體內(nèi)力學(xué)環(huán)境可有效的修復(fù)大段骨缺損模型,但是不同結(jié)構(gòu)、組成的支架材料植入體內(nèi)后新生骨組織長入速率存在很大的差異。研究表明,材料結(jié)構(gòu)可以明顯影響骨組織的長入速度,而孔隙率和孔徑大小又是其中最為重要的影響因素。因此研究不同孔徑大小的支架材料對(duì)大段骨缺損的治療顯得尤為重要。本研究采用三種孔徑大小(200-300μm、300-450μm、450-600μm)的磷酸鈣骨水泥材料與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外共同培養(yǎng)的方法,觀察材料表面的細(xì)胞黏附、增殖和分化能力的差異,分析材料孔徑結(jié)構(gòu)在促進(jìn)骨折愈合機(jī)制中的作用。 實(shí)驗(yàn)一CPC材料的孔徑大小與大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞黏附能力之間的關(guān)系 目的:評(píng)價(jià)不同大小孔徑的磷酸鈣骨水泥(Calcium phosphate cement,CPC)材料對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone mesenchymal stem cells ,BMSCs)黏附能力的影響。方法:用鹽析法制備三種不同孔徑的(200-300μm、300-450μm、450-600μm)CPC材料,利用Micro-CT測量三種材料的平均孔徑、孔隙率。無菌條件下取新生大鼠BMSCs原代培養(yǎng)并傳代;將三組材料分別放置于24孔板內(nèi),每個(gè)材料接種2×105個(gè)細(xì)胞后,37℃、飽和濕度環(huán)境下靜置培養(yǎng)。于接種后第12h、24h收集細(xì)胞并計(jì)數(shù),計(jì)算細(xì)胞黏附率;并在第24h收集細(xì)胞行Annexin V FITC/PI雙標(biāo)記,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡、壞死檢測,并利用掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及黏附情況。結(jié)果:micro-CT測量結(jié)果顯示:三種CPC材料孔徑間相互連通,孔隙率均大于67%,平均孔徑分別為240μm、410μm、510μm。第12h,三種材料表面細(xì)胞黏附率及壞死率均無明顯差別(P0.05);200-300μm組在第24h細(xì)胞黏附量明顯少于300-450μm組和450-600μm組,差值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);200-300μm組材料表面細(xì)胞壞死數(shù)量明顯多于450-600μm組,(P0.05)。結(jié)論:孔徑大小可影響大鼠BMSCs在多孔CPC材料上的黏附能力,隨著孔徑增大,細(xì)胞黏附率逐漸增高,細(xì)胞壞死率逐漸降低。本實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步研究孔徑結(jié)構(gòu)對(duì)細(xì)胞的增殖、分化提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)二不同孔徑CPC材料對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響 目的:評(píng)價(jià)不同大小孔徑的磷酸鈣骨水泥(Calcium phosphate cement,CPC)材料對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖能力的影響。方法:將三種不同孔徑的(200-300μm、300-450μm、450-600μm)CPC材料分為三組,每個(gè)材料接種P3代大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞5×104個(gè)細(xì)胞,37℃、飽和濕度環(huán)境下靜置培養(yǎng)。于接種后第1、4、7、14、21天用PICOGREEN細(xì)胞繁殖定量檢測試劑盒測定細(xì)胞增殖率,并在第14天、21天用戊二醛固定材料,梯度脫水、干燥噴金,利用掃描電鏡觀察材料表面細(xì)胞生長情況。結(jié)果:細(xì)胞在三組材料上均呈對(duì)數(shù)增長趨勢(shì),第14天左右即到達(dá)平臺(tái)期,在第1天三組細(xì)胞數(shù)量無明顯差異,第4天大孔徑(450-600μm)材料組細(xì)胞數(shù)量明顯高于其余兩組(P0.05),在第7天細(xì)胞數(shù)量隨孔徑的增加依次增加,3組間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),第14天和第21天200-300μm組細(xì)胞數(shù)量明顯少于其余兩組(300~450μm、450~600μm)(P0.05),300-450μm組和450-600μm組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:材料孔徑結(jié)構(gòu)可影響大鼠BMSCs在多孔CPC材料上的增殖能力,大孔徑材料較小孔徑材料更利于細(xì)胞增殖。為進(jìn)一步研究孔徑結(jié)構(gòu)對(duì)細(xì)胞的成骨分化提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)三不同孔徑CPC材料對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響 目的:評(píng)價(jià)不同大小孔徑的磷酸鈣骨水泥(Calcium phosphate cement,CPC)材料對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化能力的影響。方法:將三種不同孔徑的(200-300μm、300-450μm、450-600μm)CPC材料分為三組,每個(gè)材料接種P3代大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞5×104個(gè)細(xì)胞, 37℃、飽和濕度環(huán)境下靜置,成骨培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)。于接種后第47、14、21天用ALP活性測定試劑盒測定細(xì)胞ALP活性;并提取總RNA,qRT-PCR測定成骨相關(guān)基因的表達(dá)。結(jié)果:通過堿性磷酸酶活性測定以及qRT-PCR測定5對(duì)成骨基因顯示:在200-300μm孔徑CPC材料組表面細(xì)胞成骨分化程度明顯好于其余兩組(P0.05)。結(jié)論:材料的孔徑大小可影響大鼠BMSCs在多孔CPC材料上的成骨分化能力,小孔徑材料較大孔徑材料更利于細(xì)胞向成骨相分化。
[Abstract]:BACKGROUND : The repair of bone defects has been a difficult problem in clinic . The research and development of bone tissue engineering provides a good way for repairing large - segment bone defects .

The relationship between the pore size of CPC material and the adhesion of bone marrow mesenchymal stem cells in rats

Objective : To evaluate the effect of calcium phosphate cement ( CPC ) materials with different pore sizes on the adhesion of bone marrow mesenchymal stem cells ( MSCs ) .

Effects of different pore size CPC materials on proliferation of bone marrow mesenchymal stem cells in rats

Objective : To evaluate the effects of calcium phosphate cement ( CPC ) materials on the proliferation of bone marrow mesenchymal stem cells in rats . Methods : Three groups of different pore size ( 200 - 300 渭m , 300 - 450 渭m , 450 - 600 渭m ) CPC were divided into three groups .

Effects of three different pore size CPC materials on bone differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells in rats

Objective : To evaluate the effects of calcium phosphate cement ( CPC ) materials on the osteogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells in rats . Methods : Three different pore sizes ( 200 - 300 渭m , 300 - 450 渭m , 450 - 600 渭m ) CPC were divided into three groups .

【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 魏杰;劉昌勝;洪華;袁媛;陳芳萍;;新型可降解鈣磷骨水泥多孔支架研究[J];無機(jī)材料學(xué)報(bào);2006年04期

2 白峰;王臻;李愛民;盧建悉;王超峰;付索超;;兩種不同三維結(jié)構(gòu)β-TCP材料體內(nèi)血管化的比較研究[J];中國矯形外科雜志;2007年06期

3 唐華;徐志飛;劉昌勝;秦雄;吳彬;烏立暉;;多孔CPC組織工程肋骨支架制備及BMSCs在其表面增殖黏附的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2008年10期

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本文編號(hào)：1780925