本文選題：FLP/FRT　切入點(diǎn)：Cre/Loxp　出處：《中國(guó)臨床解剖學(xué)雜志》2017年02期

【摘要】：目的利用FLP/FRT、Cre/Loxp重組酶系統(tǒng)構(gòu)建并鑒定髓樣細(xì)胞特異性SETD4基因敲除小鼠,為深入研究SETD4的生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ)。方法將引進(jìn)的Setd4~(flox/+)小鼠自交,篩選出子代基因型為Setd4~(flox/flox)的小鼠;與FLP小鼠交配,得到Setd4~(fl/+/flp)小鼠;然后分別與C57BL/6小鼠交配去除FLP酶,篩選出Setd4~(fl/+)小鼠;與Lyz2-Cre小鼠交配,篩選出Setd4~(fl/+)/Lyz2-Cre小鼠;將得到的Setd~(4fl/+)和Setd4~(fl/+)/Lyz2-Cre小鼠交配,篩選出Setd4~(-/-)/Lyz2-Cre小鼠,即髓樣細(xì)胞特異性SETD4基因敲除小鼠。利用PCR技術(shù)鑒定小鼠基因型;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞及肝組織中SETD4的mRNA表達(dá)水平驗(yàn)證敲除情況。結(jié)果髓樣細(xì)胞特異性SETD4基因敲除小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中SETD4 mRNA水平較野生型小鼠顯著降低;而在肝組織中無(wú)顯著差異。結(jié)論利用FLP/FRT、Cre/Loxp系統(tǒng)成功構(gòu)建髓樣細(xì)胞特異性SETD4基因敲除小鼠,為后續(xù)的功能學(xué)研究提供了動(dòng)物模型。
[Abstract]:To use FLP/FRT, Cre/Loxp recombinase system construction and identification of myeloid cell specific SETD4 knockout mice, and lay the foundation for further study of biological function of SETD4. The method will introduce the Setd4~ (flox/+) mice were screened, the offspring genotype was Setd4~ (flox/flox) mice mated with FLP mice; Setd4~ (fl/+/flp) mouse and C57BL/6 mouse respectively; then remove the mating FLP enzyme, screened Setd4~ (fl/+) mice; mated with Lyz2-Cre mice, screened Setd4~ (fl/+) /Lyz2-Cre mice; the obtained Setd~ (4fl/+) and Setd4~ (fl/+) /Lyz2-Cre mice were mated and screened Setd4~ (- / -) /Lyz2-Cre mice, namely pulp cell specific SETD4 knockout mice. Mice identified by PCR genotype; SETD4 detected by real-time fluorescence quantitative PCR in peritoneal macrophages of mice liver tissue and the expression level of mRNA in the knockout. The results verify medullary fine Cell specific SETD4 knockout mice peritoneal macrophages in SETD4 mRNA levels compared with wild type mice decreased significantly; but no significant difference in liver tissue. Conclusion the use of FLP/FRT, Cre/Loxp system successfully constructed myeloid cell specific SETD4 knockout mice provide an animal model for further functional studies.

【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)病理生理學(xué)教研室廣東省蛋白質(zhì)組學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81471901,81072425) 廣東省自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(2015A030311031)
【分類號(hào)】：R-33

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本文編號(hào)：1713237