本文選題：Scrib　切入點(diǎn)：numb　出處：《廣東藥學(xué)院》2011年碩士論文

【摘要】：在胚胎發(fā)生過(guò)程中,從原腸期開(kāi)始出現(xiàn)器官的發(fā)生和分化,神經(jīng)管、體節(jié)、心臟、腦、原腸、血管等都是在這個(gè)階段產(chǎn)生的,而這一切的開(kāi)端始于囊胚期上胚層的細(xì)胞向中線運(yùn)動(dòng)形成原條產(chǎn)生中胚層(也叫EMT)。卵子及隨后的發(fā)育過(guò)程中,在受精卵內(nèi)眾多因子參與到原條的細(xì)胞運(yùn)動(dòng)及后續(xù)器官發(fā)育中,而表達(dá)在上皮類細(xì)胞中的極性蛋白基因是重要的調(diào)控一族。果蠅中極性蛋白Scrib的缺失使得果蠅上皮細(xì)胞的極性缺失,細(xì)胞過(guò)度增殖;在人類中Scrib中作為腫瘤抑制基因發(fā)揮作用;同時(shí)Scrib也在神經(jīng)發(fā)育中對(duì)神經(jīng)突觸的功能的維持、內(nèi)耳的發(fā)育也起到重要的作用。在我們前期的研究中在體外已經(jīng)證實(shí)了Scrib可以和Numb結(jié)合負(fù)調(diào)控Notch信號(hào)。這條信號(hào)通路在體內(nèi)是否有功能及有何功能,還沒(méi)有得到證實(shí)。本課題以雞胚作為動(dòng)物模型研究體內(nèi)情況下Scrib和Numb的異常表達(dá)對(duì)胚胎發(fā)育產(chǎn)生的影響及如何產(chǎn)生這種影響。我們通過(guò)原位雜交的方法分別檢測(cè)了Scrib、Numb的表達(dá),探索兩種基因在原腸期的表達(dá)規(guī)律,發(fā)現(xiàn)Scrib表達(dá)開(kāi)始于HH 4并在原條前端表達(dá),表達(dá)集中,當(dāng)?shù)竭_(dá)HH 7時(shí)則呈彌散性表達(dá);Numb的表達(dá)在早期和Scrib相同,但后期主要表達(dá)在神經(jīng)系統(tǒng)中。通過(guò)電轉(zhuǎn)染的方法分別過(guò)表達(dá)Scrib和Numb,發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)引起胚胎發(fā)育異常,過(guò)表達(dá)早期使得胚胎細(xì)胞遷移受阻,上胚層的細(xì)胞對(duì)中胚層的轉(zhuǎn)變受到抑制;后期過(guò)表達(dá)引起神經(jīng)管閉合緩慢,起到延緩發(fā)育的作用。我們用shRNA降調(diào)Scrib的表達(dá)發(fā)現(xiàn)了相反的現(xiàn)象,降調(diào)后促進(jìn)神經(jīng)管的發(fā)育。同時(shí)也檢測(cè)與神經(jīng)管發(fā)育有關(guān)的基因Pax-7、Islet-1等等,發(fā)現(xiàn)Pax-7表達(dá)不受影響,但I(xiàn)slet-1表達(dá)受到抑制。 綜上所述,我們的結(jié)果發(fā)現(xiàn)Numb和Scrib的過(guò)表達(dá)和降調(diào)對(duì)EMT的轉(zhuǎn)變和神經(jīng)管的發(fā)育具有相關(guān)性,這對(duì)于我們進(jìn)一步探索Scrib和Numb結(jié)合信號(hào)的功能及下游分子機(jī)制打下牢固的基礎(chǔ)。 結(jié)論:Scrib和numb在原腸期雞胚發(fā)育中起到重要作用,過(guò)表達(dá)Scrib和Numb抑制EMT的轉(zhuǎn)變和神經(jīng)管的發(fā)育;降調(diào)Scrib則促進(jìn)神經(jīng)管的發(fā)育。
[Abstract]:In the process of embryogenesis, organ development and differentiation begin from the proto-intestinal stage. Nerve tubes, ganglia, heart, brain, intestine, blood vessels and so on are produced at this stage. And all this begins when the cells in the ectoderm of the blastocyst move toward the midline to form the mesoderm (also known as EMT.oocyte and subsequent development), in which many factors are involved in the cellular movement of the blastocyst and in the subsequent organ development. The polarity protein gene expressed in epithelioid cells is an important regulatory family. The absence of polar protein Scrib in Drosophila results in the loss of polarity and over-proliferation of the cells in Drosophila melanogaster, and plays an important role as a tumor suppressor gene in human Scrib. Scrib also maintains synaptic function during neurodevelopment. The development of the inner ear also plays an important role. In our previous studies, it has been demonstrated in vitro that Scrib can bind to Numb to negatively regulate the Notch signal. The effect of abnormal expression of Scrib and Numb on embryonic development in vivo was studied by using chicken embryo as animal model. In situ hybridization was used to detect the expression of Scribbun numb. The expression of Scrib began at HH4 and expressed at the front of the original strip. When HH7 reached HH7, the expression of Scrib was diffusely expressed in the same way as Scrib in the early stage. However, in the later stage, the expression of Scrib and numbwas over expressed in the nervous system. It was found that overexpression caused abnormal embryonic development, and early overexpression blocked the migration of embryonic cells. The changes of mesoderm were inhibited by the cells in the ectoderm, and the slow closure of the neural tube caused by the late overexpression, which delayed the development of the neural tube. We found the opposite phenomenon with the down-regulation of Scrib expression in shRNA. At the same time, the gene Pax-7 Islet-1 and so on were detected. It was found that the expression of Pax-7 was not affected, but the expression of Islet-1 was inhibited. In conclusion, our results show that the overexpression and downregulation of Numb and Scrib are related to the transition of EMT and the development of neural tube, which lays a solid foundation for us to further explore the function of Scrib and Numb binding signal and the downstream molecular mechanism. Conclusion the expression of Scrib and Numb inhibits the transformation of EMT and the development of neural tube, and the downregulation of Scrib can promote the development of neural tube. [conclusion] Scrib and numb play an important role in the development of chicken embryo in prointestinal stage, and the overexpression of Scrib and Numb inhibit the development of EMT and neural tube.
【學(xué)位授予單位】：廣東藥學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R321

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本文編號(hào)：1681502