本文選題：六價鉻　切入點(diǎn)：肝細(xì)胞　出處：《中南大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：目的：在體外試驗(yàn)系統(tǒng),初步探討線粒體電子傳遞功能障礙在Cr(Ⅵ)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中的作用,進(jìn)一步闡明Cr(Ⅵ)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制。 方法：以L-02肝細(xì)胞為受試細(xì)胞,通過MTT試驗(yàn)檢測Cr(Ⅵ)及與呼吸抑制劑(DPI、ROT、AA)或保護(hù)劑(Vit C)聯(lián)合作用對L-02肝細(xì)胞存活率的影響,篩選出25μmol/L Cr(Ⅵ)、2.5μmol/L DPI、5μmol/L ROT、lμg/mL AA和2mmol/L Vit C進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn),染毒時間為12h。通過紫外可見分光光度計檢測線粒體內(nèi)Cr(Ⅵ)的還原速率,多功能酶標(biāo)儀檢測細(xì)胞內(nèi)ATP含量和活性氧(ROS)的含量變化,氧電極檢測細(xì)胞線粒體呼吸功能(耗氧速率),酶標(biāo)儀檢測細(xì)胞內(nèi)caspase-3的活性,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率檢測細(xì)胞凋亡 結(jié)果： 1.Cr(Ⅵ)引起L-02肝細(xì)胞存活率降低：Cr(Ⅵ)在10-100μmol/L處理濃度范圍內(nèi),能明顯引起L-02肝細(xì)胞存活率的降低(P0.05),處理濃度和細(xì)胞存活率之間存在負(fù)相關(guān)(r12h=—0.980,P0.05),選取對Cr(Ⅵ)處理的細(xì)胞生存率影響較明顯2.5μmol/L DPI、5μmol/L ROT1μg/mL AA和2mmol/L Vit C進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。 2.線粒體內(nèi)Cr(Ⅵ)還原速率：不同呼吸底物對線粒體中Cr(Ⅵ)的還原速率的影響不同,復(fù)合體Ⅰ的底物蘋果酸+谷氨酸使線粒體中Cr(Ⅵ)的還原量顯著增加,而復(fù)合體Ⅳ的底物Vit C使線粒體中Cr(Ⅵ)的還原量明顯降低(P0.05)。不同呼吸抑制劑對線粒體中Cr(Ⅵ)的還原速率的影響不同(P0.01)。復(fù)合體Ⅳ抑制劑NaN3時,線粒體中Cr(Ⅵ)的還原量最大(P0.05)。 3.Cr(Ⅵ)對肝細(xì)胞細(xì)胞呼吸功能影響：與對照組相比, Cr(Ⅵ)單獨(dú)處理組細(xì)胞氧耗速率明顯降低(P0.05)；與相同濃度的Cr(Ⅵ)單獨(dú)處理組相比,加入呼吸鏈抑制劑(DPI、ROT、AA)聯(lián)合處理組細(xì)胞耗氧速率均明顯降低(P0.05),加入VitC聯(lián)合處理組細(xì)胞耗氧速率明顯增高(P0.05) 4.Cr(Ⅵ)對肝細(xì)胞ATP含量的影響：與對照組相比, Cr(Ⅵ)單獨(dú)處理組ATP含量明顯降低(P0.05)；與相同濃度的Cr(Ⅵ)單獨(dú)處理組相比,加入呼吸鏈抑制劑(DPI、ROT、AA)聯(lián)合處理組ATP含量均明顯降低(P0.05),加入VitC聯(lián)合處理組ATP含量明顯增高(P0.05) 5.Cr(Ⅵ)對肝細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響：與對照組相比,Cr(Ⅵ)單獨(dú)處理組細(xì)胞ROS產(chǎn)量明顯增高(P0.05)；與相同濃度的Cr(Ⅵ)單獨(dú)處理組相比,加入呼吸鏈抑制劑(DPI、ROT、AA)聯(lián)合處理組細(xì)胞ROS產(chǎn)量均明顯增高(P0.05),加入Vit C聯(lián)合處理組ROS產(chǎn)量明顯降低(P0.05)。 6.Cr(Ⅵ)對肝細(xì)胞caspase-3的影響：與對照組相比,Cr(Ⅵ)單獨(dú)處理組caspase-3活性明顯升高(P0.05)；與相同濃度的Cr(Ⅵ)單獨(dú)處理組相比,加入呼吸鏈抑制劑(DPI、ROT、AA)聯(lián)合處理組細(xì)胞caspase-3活性該變量均明顯升高(P0.05),加入Vit C聯(lián)合處理組細(xì)胞caspase-3活性明顯降低(P0.05)。 7.Cr(Ⅵ)誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡：與對照組相比,Cr(Ⅵ)單獨(dú)處理組細(xì)胞凋亡率明顯升高(P0.05)；與相同濃度的Cr(Ⅵ)單獨(dú)處理組相比,加入呼吸鏈抑制劑(DPI、ROT、AA)聯(lián)合處理組細(xì)胞凋亡率均明顯升高(P0.05),加入Vit C聯(lián)合處理組細(xì)胞凋亡率明顯降低(P0.05)。 結(jié)論： 1.Cr(Ⅵ)從線粒體復(fù)合體Ⅰ得到電子而被還原,在此還原過程中產(chǎn)生ROS,產(chǎn)生的ROS誘導(dǎo)線粒體損傷和細(xì)胞凋亡因子caspase-3釋放,從而誘導(dǎo)L-02肝細(xì)胞凋亡。 2.主呼吸鏈抑制劑(尤其是ROT)能使呼吸鏈電子從復(fù)合體Ⅰ漏出,使Cr(Ⅵ)還原增加,使Cr(Ⅵ)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用增強(qiáng)。 3. VitC能減輕Cr(Ⅵ)引起的線粒體損傷,使線粒體呼吸功能部分恢復(fù),使細(xì)胞內(nèi)ATP水平升高,影響caspase3的活性,拮抗Cr(Ⅵ)誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。 4.在Cr(Ⅵ)誘導(dǎo)的L-02肝細(xì)胞凋亡過程中,電子傳遞功能障礙起重要作用。
[Abstract]:Objective: To explore the role of mitochondrial electron transport dysfunction in Cr (VI) induced apoptosis, and further elucidate the possible mechanism of Cr (VI) inducing apoptosis.
Methods: the L-02 liver cells were tested by cell MTT assay for detection of Cr (VI) and respiratory inhibitors (DPI, ROT, AA) or (Vit C) combined with protective effects on the survival rates of L-02 liver cells, screened 25 mol/L Cr (VI), 2.5 mol/L DPI, 5 mol/L ROT, l g/mL AA and 2mmol/L Vit C for the subsequent test, exposure time is 12h. by UV VIS spectrophotometer to detect mitochondrial Cr (VI) reduction rate, multifunctional microplate detection of intracellular ATP content and reactive oxygen species (ROS) of the content of oxygen electrode for the detection of cell line mitochondrial respiratory function (oxygen uptake rate), microplate detection of intracellular caspase-3 activity, cell apoptosis was detected by flow cytometry to detect apoptosis
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本文編號：1681461