發(fā)布時(shí)間：2018-03-26 04:39

  本文選題：肺炎鏈球菌　切入點(diǎn)：Tpx蛋白　出處：《中國(guó)病原生物學(xué)雜志》2017年06期

【摘要】：目的原核表達(dá)、純化肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)Tpx蛋白并測(cè)定其活性。方法利用生物信息學(xué)方法分析Tpx蛋白的生物學(xué)特性。設(shè)計(jì)特異性引物,PCR擴(kuò)增Tpx基因并對(duì)進(jìn)行雙酶切,酶切片段連接到表達(dá)質(zhì)粒pET28a。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21(DE3),利用IPTG誘導(dǎo)重組Tpx蛋白表達(dá),使用Ni 2+親和層析進(jìn)行純化,采用氧化鐵二甲酚橙法(FOX)測(cè)定其活性。結(jié)果生物信息學(xué)分析Tpx蛋白無(wú)信號(hào)肽,無(wú)跨膜結(jié)構(gòu)域。α-螺旋、延伸主鏈、β-轉(zhuǎn)角和無(wú)規(guī)卷曲的含量分別為30%、27.6%、11.6和30.7%。晶體結(jié)構(gòu)在蛋白結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)(PDB)中的登陸號(hào)為1psq.1.A。PCR擴(kuò)增Tpx基因片段大小為492bp,連接到pET28a后獲得重組質(zhì)粒pET28a-Tpx。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DE3后經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)分子質(zhì)量單位約為22ku的重組蛋白,經(jīng)親和層析得到高純度的重組Tpx蛋白,該蛋白能分解H2O2和叔丁基過(guò)氧化氫(t-BHP)。結(jié)論成功構(gòu)建pET28a-Tpx質(zhì)粒,表達(dá)的重組Tpx蛋白具有氧化酶活性,為研究肺炎鏈球菌的抗氧化機(jī)制奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to express, purify and determine the activity of Streptococcus pneumoniae)Tpx protein in E. pneumoniae. Methods the biological characteristics of Tpx protein were analyzed by bioinformatics. The recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli BL21DE3G, and the recombinant Tpx protein was induced by IPTG and purified by Ni 2 affinity chromatography. The activity of Tpx protein was determined by ferric oxide xylenol orange method. Results Bioinformatics analysis showed that Tpx protein had no signal peptide and no transmembrane domain. The contents of extended main chain, 尾 -turn angle and random coil were 3027.6and 11.6 and 30.7.The landing number of crystal structure in protein structure database was 1psq.1.A.PCR amplification of Tpx gene fragment size was 492bp. the recombinant plasmid pET28a-Tpx.Recombinant plasmid pET28a-Tpx. After DE3, IPTG was used to induce the expression of recombinant protein with molecular weight unit (22ku). High purity recombinant Tpx protein was obtained by affinity chromatography. The recombinant Tpx protein could decompose H2O2 and tert-#china_person0# hydrogen peroxide. Conclusion pET28a-Tpx plasmid was successfully constructed and the expressed recombinant Tpx protein had oxidase activity. It lays an experimental foundation for the study of anti-oxidation mechanism of Streptococcus pneumoniae.
【作者單位】： 南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院急診科;南華大學(xué)病原生物學(xué)研究所 特殊病原體防控湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：湖南省分子靶標(biāo)新藥研究協(xié)同創(chuàng)新中心項(xiàng)目(湘教通2014-405號(hào)) 特殊病原體防控湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室資助項(xiàng)目[湘科計(jì)字(2014)5號(hào),湘教通(2012)312號(hào)]
【分類(lèi)號(hào)】：R378.1

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本文編號(hào)：1666370