發(fā)布時(shí)間：2018-03-22 05:39

  本文選題：手足口病　切入點(diǎn)：腸道病毒EV　出處：《中國(guó)循證兒科雜志》2017年05期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的根據(jù)貴州省手足口病患兒腸道病毒71型(EV71)分離株的VP1結(jié)構(gòu)蛋白序列研制多肽疫苗并研究其對(duì)小鼠的免疫保護(hù)作用。方法 2013年3月1日至2015年12月31日從貴州省手足口病患兒的咽拭子樣本中分離到17株EV71毒株,其VP1氨基酸序列一致(共297個(gè)氨基酸),據(jù)此設(shè)計(jì)并合成多肽片段(除最后一段為27個(gè)氨基酸外,其余均為20個(gè)氨基酸);用感染EV71的手足口病病愈患兒的陽(yáng)性血清,通過間接ELISA法篩選出免疫原性較好的多肽片段,制成多肽疫苗;用多肽疫苗免疫ICR健康雌鼠,并設(shè)未免疫的對(duì)照(Con);將雌鼠的子代小鼠隨機(jī)分為注射和不注射EV71病毒顆粒的2個(gè)亞組;注射病毒2 d后處死所有小鼠,分別取小鼠的骨骼肌、小腸和腦組織,通過RT-PCR檢測(cè)病毒感染情況,同時(shí)HE染色后在顯微鏡下觀察病理改變。結(jié)果共設(shè)計(jì)并合成19段含交叉序列的多肽片段,從中篩選出3段免疫原性較好的(P2:VSRALTHALPAPTGQNTQVS;P4:ALQAAEIGASSNASDESMIE;P8:YANWDIDITGYAQMRRKVEL),制成多肽疫苗并免疫雌鼠,取雌鼠的子代小鼠進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。RT-PCR結(jié)果顯示,各感染病毒亞組的骨骼肌、小腸和腦組織中均能檢測(cè)到EV71病毒,而未感染病毒亞組均檢測(cè)不到;病理結(jié)果顯示,未接種多肽疫苗母鼠的子代小鼠在感染EV71病毒后,骨骼肌、小腸和腦組織均出現(xiàn)明顯的炎性改變;接種多肽疫苗母鼠的子代小鼠骨骼肌、小腸和腦組織的炎性改變明顯減輕,3種多肽疫苗對(duì)EV71所致炎癥的改善作用無明顯差異;接種多肽疫苗母鼠的未注射病毒亞組子代小鼠骨骼肌、小腸和腦組織中均未檢測(cè)到EV71病毒,也未觀察到明顯的炎性改變。結(jié)論本研究成功制備VP1抗原表位多肽疫苗并在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了其有效性和安全性,可為今后相關(guān)疫苗的研制提供方法學(xué)借鑒。
[Abstract]:Objective to develop a polypeptide vaccine based on the VP1 structural protein sequence of enterovirus 71 EV71 isolated from children with hand-foot-mouth disease in Guizhou province and to study its immuno-protective effect on mice. Methods from March 1, 2013 to December 31, 2015, a polypeptide vaccine was prepared from Guigui. Seventeen strains of EV71 were isolated from throat swabs of children with hand, foot and mouth disease. Its VP1 amino acid sequence was identical (297 amino acids), according to which the peptide fragments were designed and synthesized (except for 27 amino acids in the last segment, the rest were 20 amino acids). Polypeptide vaccine was prepared by indirect ELISA method, and ICR healthy female mice were immunized with polypeptide vaccine. The offspring of female mice were randomly divided into two subgroups of injection and non-injection of EV71 virus particles. After 2 days of injection of the virus, all the mice were killed and the skeletal muscle, small intestine and brain tissue of the mice were taken, respectively. The virus infection was detected by RT-PCR, and the pathological changes were observed under microscope after HE staining. Results A total of 19 polypeptide fragments containing cross sequences were designed and synthesized. Three segments of VSRALTHALPAPTGQNTQQVSU P4ALQAAEIGASSNASDESMIEN P8: YANWDIDITGYAQRKVELL were selected from the three segments of immunogenicity to make polypeptide vaccine and immunize female mice. The results of follow up test .RT-PCR showed that EV71 virus could be detected in skeletal muscle, small intestine and brain tissue of each subgroup of infected mice. The pathological results showed that there were obvious inflammatory changes in skeletal muscle, small intestine and brain tissue after infection of EV71 virus in the offspring of mice without polypeptide vaccine. The inflammatory changes of small intestine and brain tissues in the skeletal muscle, small intestine and brain tissues of maternal mice inoculated with polypeptide vaccine had no significant difference in ameliorating the inflammation induced by EV71. No EV71 virus was detected in the skeletal muscle, small intestine and brain tissues of the uninjected virus subgroup of mice inoculated with polypeptide vaccine. Conclusion VP1 epitope peptide vaccine has been successfully prepared and proved to be effective and safe in animal experiments, which may provide methodological reference for the development of related vaccines in the future.
【作者單位】： 遵義醫(yī)學(xué)院研究生院;遵義醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院兒童重癥醫(yī)學(xué)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目:81260292 遵義市科技局科技計(jì)劃基金項(xiàng)目:遵市科合社字【2013】14號(hào) 遵義市科學(xué)技術(shù)基金項(xiàng)目遵市科合人才【2015】24號(hào) 遵義市“15851人才精英工程”培養(yǎng)人才在研項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)資助項(xiàng)目:2013-20
【分類號(hào)】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 朱頤申;張霓;;多肽疫苗研究進(jìn)展[J];中國(guó)疫苗和免疫;2013年01期

2 趙小寧,惠宏襄,徐德忠;多肽疫苗研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊(cè);1997年06期

3 王曉勤;抗寄生蟲多肽疫苗的研制策略[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊(cè));1994年01期

4 劉慶良;多肽疫苗的設(shè)計(jì)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊(cè);1998年01期

5 呂鳳林,何鳳慈;利用納米材料制作多肽疫苗佐劑的思考[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2001年06期

6 蔣常生;;微膠粒乙型肝炎多肽疫苗的制備[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).生物制品分冊(cè);1982年03期

7 徐道華;周晨慧;夏永鵬;邱宗蔭;賈正才;周偉;;宮頸癌治療性多肽疫苗的合成及其誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞效應(yīng)的研究[J];中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué);2007年02期

8 倪紅霞;鼻內(nèi)免疫新型佐劑與多肽疫苗后的抗體應(yīng)答[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊(cè);2001年03期

9 喻剛;楊京生;全家嫵;;四價(jià)重組A群鏈球菌多肽疫苗基因序列的合成及克隆[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2009年05期

10 翟嵩;黨雙鎖;李亞萍;賈曉黎;王媛;王秀芳;王文俊;李梅;;TGF-β1多肽疫苗抗肝纖維化的鑒定[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前5條

1 王芳;才子斌;王毅;徐煌;侯立中;顏煒群;;乳腺癌HER-2/neu肽疫苗的實(shí)驗(yàn)研究[A];增強(qiáng)自主創(chuàng)新能力 促進(jìn)吉林經(jīng)濟(jì)發(fā)展——啟明杯·吉林省第四屆科學(xué)技術(shù)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2006年

2 劉征;馬翠卿;張玲;姚智燕;馮惠東;魏林;;A族鏈球菌多價(jià)疫苗的構(gòu)建及表達(dá)[A];河北省免疫學(xué)會(huì)第六次免疫學(xué)大會(huì)資料匯編[C];2010年

3 尚小云;;表位改造在腫瘤治療性多肽疫苗研究中的進(jìn)展[A];第六屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

4 呂鳳林;;基于HPV-6、11之L1蛋白的多肽疫苗研究[A];2004年中國(guó)科學(xué)院新生病毒性疾病控制學(xué)術(shù)討論會(huì)摘要集[C];2004年

5 龔黎明;葛瓊;嚴(yán)菊英;盧亦愚;馮燕;茅海燕;李敏紅;周敏;;浙江省腸道病毒71型的分離與VP1區(qū)域序列分析[A];應(yīng)對(duì)突發(fā)公共衛(wèi)生事件論壇論文集[C];2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 王芳;高特異性HER2/neu手性多肽疫苗實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2004年

2 曹勝利;血吸蟲病多肽疫苗的設(shè)計(jì)與合成研究[D];北京醫(yī)科大學(xué);1997年

3 邵明玉;口蹄疫VP1表位六聚體（FMD-VP1-Hetero6）重組蛋白疫苗[D];吉林大學(xué);2005年

4 王生;豚鼠結(jié)膜炎衣原體噬菌體phiCPG1衣殼蛋白Vp1的生物學(xué)作用[D];天津醫(yī)科大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 吳梅芝;基于EGFR二聚化靶向策略的多肽疫苗構(gòu)建[D];廣東藥學(xué)院;2013年

2 吳孔田;CCR5自體多肽疫苗的構(gòu)建及其免疫原性的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

3 姚衛(wèi)鋒;衣原體噬菌體phiCPG1衣殼蛋白Vp1的原核表達(dá)及提純研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2007年

，

本文編號(hào)：1647338