本文選題：手足口病　切入點：腸道病毒EV　出處：《中國循證兒科雜志》2017年05期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的根據(jù)貴州省手足口病患兒腸道病毒71型(EV71)分離株的VP1結(jié)構(gòu)蛋白序列研制多肽疫苗并研究其對小鼠的免疫保護作用。方法 2013年3月1日至2015年12月31日從貴州省手足口病患兒的咽拭子樣本中分離到17株EV71毒株,其VP1氨基酸序列一致(共297個氨基酸),據(jù)此設計并合成多肽片段(除最后一段為27個氨基酸外,其余均為20個氨基酸);用感染EV71的手足口病病愈患兒的陽性血清,通過間接ELISA法篩選出免疫原性較好的多肽片段,制成多肽疫苗;用多肽疫苗免疫ICR健康雌鼠,并設未免疫的對照(Con);將雌鼠的子代小鼠隨機分為注射和不注射EV71病毒顆粒的2個亞組;注射病毒2 d后處死所有小鼠,分別取小鼠的骨骼肌、小腸和腦組織,通過RT-PCR檢測病毒感染情況,同時HE染色后在顯微鏡下觀察病理改變。結(jié)果共設計并合成19段含交叉序列的多肽片段,從中篩選出3段免疫原性較好的(P2:VSRALTHALPAPTGQNTQVS;P4:ALQAAEIGASSNASDESMIE;P8:YANWDIDITGYAQMRRKVEL),制成多肽疫苗并免疫雌鼠,取雌鼠的子代小鼠進行后續(xù)試驗。RT-PCR結(jié)果顯示,各感染病毒亞組的骨骼肌、小腸和腦組織中均能檢測到EV71病毒,而未感染病毒亞組均檢測不到;病理結(jié)果顯示,未接種多肽疫苗母鼠的子代小鼠在感染EV71病毒后,骨骼肌、小腸和腦組織均出現(xiàn)明顯的炎性改變;接種多肽疫苗母鼠的子代小鼠骨骼肌、小腸和腦組織的炎性改變明顯減輕,3種多肽疫苗對EV71所致炎癥的改善作用無明顯差異;接種多肽疫苗母鼠的未注射病毒亞組子代小鼠骨骼肌、小腸和腦組織中均未檢測到EV71病毒,也未觀察到明顯的炎性改變。結(jié)論本研究成功制備VP1抗原表位多肽疫苗并在動物實驗中證實了其有效性和安全性,可為今后相關疫苗的研制提供方法學借鑒。
[Abstract]:Objective to develop a polypeptide vaccine based on the VP1 structural protein sequence of enterovirus 71 EV71 isolated from children with hand-foot-mouth disease in Guizhou province and to study its immuno-protective effect on mice. Methods from March 1, 2013 to December 31, 2015, a polypeptide vaccine was prepared from Guigui. Seventeen strains of EV71 were isolated from throat swabs of children with hand, foot and mouth disease. Its VP1 amino acid sequence was identical (297 amino acids), according to which the peptide fragments were designed and synthesized (except for 27 amino acids in the last segment, the rest were 20 amino acids). Polypeptide vaccine was prepared by indirect ELISA method, and ICR healthy female mice were immunized with polypeptide vaccine. The offspring of female mice were randomly divided into two subgroups of injection and non-injection of EV71 virus particles. After 2 days of injection of the virus, all the mice were killed and the skeletal muscle, small intestine and brain tissue of the mice were taken, respectively. The virus infection was detected by RT-PCR, and the pathological changes were observed under microscope after HE staining. Results A total of 19 polypeptide fragments containing cross sequences were designed and synthesized. Three segments of VSRALTHALPAPTGQNTQQVSU P4ALQAAEIGASSNASDESMIEN P8: YANWDIDITGYAQRKVELL were selected from the three segments of immunogenicity to make polypeptide vaccine and immunize female mice. The results of follow up test .RT-PCR showed that EV71 virus could be detected in skeletal muscle, small intestine and brain tissue of each subgroup of infected mice. The pathological results showed that there were obvious inflammatory changes in skeletal muscle, small intestine and brain tissue after infection of EV71 virus in the offspring of mice without polypeptide vaccine. The inflammatory changes of small intestine and brain tissues in the skeletal muscle, small intestine and brain tissues of maternal mice inoculated with polypeptide vaccine had no significant difference in ameliorating the inflammation induced by EV71. No EV71 virus was detected in the skeletal muscle, small intestine and brain tissues of the uninjected virus subgroup of mice inoculated with polypeptide vaccine. Conclusion VP1 epitope peptide vaccine has been successfully prepared and proved to be effective and safe in animal experiments, which may provide methodological reference for the development of related vaccines in the future.
【作者單位】： 遵義醫(yī)學院研究生院;遵義醫(yī)學院第三附屬醫(yī)院兒童重癥醫(yī)學科;
【基金】：國家自然科學基金項目:81260292 遵義市科技局科技計劃基金項目:遵市科合社字【2013】14號 遵義市科學技術基金項目遵市科合人才【2015】24號 遵義市“15851人才精英工程”培養(yǎng)人才在研項目經(jīng)費資助項目:2013-20
【分類號】：R392

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本文編號：1647338