本文選題：脂肪細(xì)胞　切入點：胰島素抵抗　出處：《華中科技大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的 觀察不同種類、不同濃度的脂肪酸對3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞胰島素刺激狀態(tài)和ASP刺激狀態(tài)下細(xì)胞炎癥因子(IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1α)分泌水平的影響,以及對細(xì)胞炎癥信號因子(JNK1、IKKβ)蛋白表達(dá)的影響,以探討ASP對脂肪細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用。 方法 1、采用經(jīng)典的激素“雞尾酒”法(誘導(dǎo)培養(yǎng)基由10μg/ml胰島素、0.5 mmol/L 1-甲基3-異丁基黃嘌呤和1.0μmol/L地塞米松配置而成),將3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化為3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞,倒置顯微鏡下觀察3T3-L1前脂肪細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化,油紅O染色觀察脂滴的聚集。 2、3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞給予油酸、棕櫚酸孵育過夜后,采用ELISE方法檢測ASP刺激以及胰島素刺激的IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1α分泌水平。 3、3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞給予油酸、棕櫚酸孵育過夜后,采用Western Blot法檢測ASP刺激以及胰島素刺激的JNK1、IKKβ蛋白表達(dá)。 結(jié)果 1、3T3-L1前脂肪細(xì)胞表現(xiàn)為成纖維細(xì)胞樣的長梭形,胞漿中無脂滴;分化成熟后,細(xì)胞變圓、變大,可見明顯的脂滴圍繞胞核,呈典型“戒環(huán)”形狀。 2、在脂肪酸誘導(dǎo)的胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下,ASP可以從不同程度上抑制IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1α分泌。油酸組顯著下調(diào)57% MIP-1α的分泌(P0.05,1.0 mmol/L ),棕櫚酸組顯著抑制50%IL-6的分泌(P0.05,1.0 mmol/L )和48% TNF-α的分泌(P0.05,1.0 mmol/L )。高濃度的油酸和棕櫚酸可以明顯抑制ASP刺激的JNK1蛋白表達(dá),輕度抑制IKKβ的表達(dá)。油酸組JNK1的表達(dá)下降34%(P0.05,1.0 mmol/L),棕櫚酸組下降54%(P0.01,1.0 mmol/L)。 3、在脂肪酸誘導(dǎo)的胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下,胰島素刺激的3T3-L1脂肪細(xì)胞IL-6、TNF-α、MCP-1的分泌隨FFA濃度的升高呈下降趨勢,油酸組顯著增強MIP-1α的分泌178% (P0.05,1.0 mmol/L ),棕櫚酸組顯著抑制37% MCP-1(P0.05,1.0 mmol/L )和51% TNF-α分泌(P0.05,1.0 mmol/L )。與ASP刺激不同的是,胰島素刺激狀態(tài)下,油酸、棕櫚酸不影響JNK1和IKKβ的表達(dá)。 結(jié)論 在脂肪酸誘導(dǎo)的脂肪細(xì)胞胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下,ASP在一定程度上抑制炎癥因子分泌,而且還參與調(diào)節(jié)JNK、IKK/NF-κB信號通路中重要信號分子的功能, ASP參與了脂肪細(xì)胞脂毒性-炎癥反應(yīng)的調(diào)控。
[Abstract]:Purpose. To observe the effects of different kinds of fatty acids on the secretion of IL-6 TNF- 偽 MCP-1mMIP-1 偽 in 3T3-L1 mature adipocytes stimulated by insulin and ASP, and on the expression of JNK1I-IKK 尾. To investigate the effect of ASP on the inflammatory response of adipocytes. Method. 1. The 3T3-L1 preadipocytes were induced to differentiate into 3T3-L1 mature adipocytes by the classical hormone "cocktail" method (the induction medium consisted of 10 渭 g / ml insulin and 0.5 mmol/L 1-methyl-isobutyl xanthine and 1.0 渭 mol/L dexamethasone). The morphological changes of 3T3-L1 preadipocytes were observed under inverted microscope, and the aggregation of lipid droplets was observed by oil red O staining. 2the mature adipocytes were treated with oleic acid and palmitic acid for the night. The levels of MIP-1 偽 secreted by ASP and insulin stimulated IL-6TNF- 偽 MCP-1were detected by ELISE. 3T3-L1 mature adipocytes were treated with oleic acid and palmitic acid for the night. Western Blot assay was used to detect the expression of ASP stimulated and insulin-stimulated JNK1KK 尾 protein. Results. 1the preadipocytes of 3T3-L1 showed long fusiform like fibroblasts with no lipid droplets in the cytoplasm, and after differentiation and maturation, the cells became round and large, and obvious lipid droplets surrounded the nucleus, taking the shape of typical "ring ring". 2. Under the condition of insulin resistance induced by fatty acid, ASP inhibited the secretion of IL-6 TNF- 偽 and MCP-1 / MIP-1 偽 in varying degrees. In oleic acid group, the secretion of 57% MIP-1 偽 was significantly down-regulated (P0.051.0 mmol/L), and palmitic acid group significantly inhibited the secretion of 50 TNF- 偽 (P0.051.0 mmol/L) and 48% TNF- 偽 (P0.051-1.0 mmol/L). High concentrations of oleic acid and palmitic acid could significantly inhibit the expression of JNK1 protein stimulated by ASP. The expression of IKK 尾 was slightly inhibited in oleic acid group (P 0.05) and palmitic acid group (P 0.01) 1.0 mmol / L 路L ~ (-1) 路L ~ (-1) 路min ~ (-1) 路L ~ (-1) 路L ~ (-1) 路L ~ (-1) 路L ~ (-1) ~ (-1). 3. Under the condition of insulin resistance induced by fatty acid, the secretion of IL-6TNF- 偽 MCP-1 in 3T3-L1 adipocytes induced by insulin decreased with the increase of FFA concentration. In oleic acid group, the secretion of MIP-1 偽 was significantly increased by 178% ~ (178%) (P _ (0.05) ~ (1.0) mmol/L), while in palmitic acid group it was significantly inhibited by 37% MCP-1 (P _ (0.05N) ~ (1.0) mmol/L) and 51% ~ (TNF- 偽) (P _ (0.05N) ~ (1.0) mmol/L). In contrast to ASP stimulation, oleic acid and palmitic acid did not affect the expression of JNK1 and IKK 尾. Conclusion. Under the condition of insulin resistance induced by fatty acids, ASP inhibited the secretion of inflammatory factors to some extent. ASP is involved in the regulation of lipid toxicity and inflammation in adipocytes.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R363

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1604121