本文選題：日本血吸蟲(chóng)　切入點(diǎn)：TOR蛋白　出處：《中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)》2017年01期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：本研究擴(kuò)增到日本血吸蟲(chóng)Sj TOR完整的蛋白編碼區(qū)并將其克隆到p XJ40-FLAG載體的HindⅢ、XhoⅠ酶切位點(diǎn),構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒p XJ40-FLAG-TOR。將測(cè)序正確的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá),然后應(yīng)用間接免疫熒光、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western blot檢測(cè)其在293T細(xì)胞中的表達(dá)情況。測(cè)序結(jié)果表明Sj TOR蛋白編碼區(qū)為1245 bp,真核表達(dá)質(zhì)粒p XJ40-FLAG-TOR構(gòu)建成功。轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞48 h后,應(yīng)用間接免疫熒光染色可觀察到轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒的細(xì)胞有特異性綠色熒光,空質(zhì)粒對(duì)照則未見(jiàn)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,在轉(zhuǎn)染質(zhì)粒p XJ40-FLAG-TOR 6 h后Sj TOR蛋白的基因已有轉(zhuǎn)錄,至轉(zhuǎn)染24 h時(shí)轉(zhuǎn)錄水平最高,隨后開(kāi)始降低。Western blot結(jié)果顯示Sj TOR蛋白分子量約53 k Da,可被FLAG單抗和抗Sj TOR-ED1抗血清識(shí)別。結(jié)果表明Sj TOR蛋白可以在293 T細(xì)胞中表達(dá),為進(jìn)一步研究Sj TOR蛋白的生物學(xué)功能和DNA疫苗打下了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In this study, the complete protein coding region of Sj TOR of Schistosoma japonicum was amplified and cloned into the Hind 鈪，

本文編號(hào)：1599311