本文選題：BMSCs　切入點(diǎn)：紅骨髓上清液　出處：《蚌埠醫(yī)學(xué)院》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景：骨折延遲愈合及骨不連是骨科常見疾病，自體紅骨髓移植用于治療骨折延遲愈合及骨不連臨床效果顯著，其作用機(jī)制尚需進(jìn)一步探討。 目的：本研究旨在探討兔紅骨髓上清液中六種成骨性生長因子：骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(bone morphogonetic protein-2,BMP-2)、胰島素樣生長因子-I (insulin-like growthfactor-I,IGF-I)、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblastic growth factor,bFGF)、血小板衍生生長因子(platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)、血管內(nèi)皮生長因子165(vascularendothelial growth factor165, VEGF165)的含量。并探討兔紅骨髓上清液用于體外分離培養(yǎng)的兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）向成骨細(xì)胞分化的影響，為紅骨髓治療骨折延遲愈合及骨不連提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：1.通過酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-Linked ImmunosorbentAssay，ELISA）測定兔紅骨髓及外周血中BMP-2、IGF-I、bFGF、PDGF-BB、TGF-β1、VEGF165的含量。2.密度梯度離心法分離培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stemcells, BMSCs）。3.流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測兔BMSCs細(xì)胞表面黏附分子CD44、CD45表達(dá)。4.含15%紅骨髓上清液的DMEM/F12誘導(dǎo)BMSCs成骨分化。5.倒置顯微鏡逐日觀察細(xì)胞生長及形態(tài)特征。6.MTT法檢測BMSCs增殖情況。7.茜素紅染色檢測鈣結(jié)節(jié)形成情況。8.堿性磷酸酶染色檢測細(xì)胞堿性磷酸酶(Alkalinephosphatase,ALP)活性。9.酶動(dòng)力學(xué)法檢測細(xì)胞堿性磷酸酶活性。10.RT-PCR檢測骨鈣素（Osteocalcin）和I型膠原（type I collagen）mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：1.兔紅骨髓上清液中成骨性生長因子BMP-2、IGF-I、bFGF、PDGF-BB、TGF-β1、VEGF165含量依次為分別為(1.26±0.14) μg/L，(3.87±0.35) μg/L，(4.34±0.22) ng/L，(4.08±0.36) ng/L，(31.45±1.91) ng/L，(14.81±2.01) ng/L顯著高于兔外周血中對應(yīng)含量(0.10±0.02) μg/L,(0.19±0.04) μg/L,(0.28±0.04) ng/L,(0.29±0.08) ng/L,(1.86±0.38) ng/L,(0.99±0.23) ng/L，差異均有顯著性(P 0.01)。2.成功地分離培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)，，CD44陽性表達(dá)率99.67%，CD45陽性表達(dá)率2.34%。3.紅骨髓上清液對BMSCs的增殖作用顯著高于對照組（胎牛血清組），從第3天起至第9天OD值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。4.紅骨髓上清液能顯著增加成骨分化的BMSCs的ALP含量，實(shí)驗(yàn)組[第3,6,9,12和15天:(4.55±0.15),(8.98±0.20),(12.83±0.21),(15.65±0.23),(15.23±0.19) U/100ml]，與對照組胎牛血清組比較[第3,6,9,12和15天:(2.78±0.08),(3.31±0.13),(3.77±0.13),(4.43±0.16),(4.23±0.12) U/100ml]，差異有顯著性(P0.01)。5.含15%紅骨髓上清液的DMEM/F12誘導(dǎo)BMSCs成骨分化，14天后BMSCs茜素紅染色陽性、ALP染色陽性，21天后BMSCs陽性表達(dá)Col I和OCN mRNA，對照組均為陰性表達(dá)。 結(jié)論： 1.兔紅骨髓上清液中成骨性生長因子BMP-2、IGF-I、bFGF、PDGF-BB、TGF-β1、VEGF165含量顯著高于兔外周血，差異有顯著性(P0.01)。 2.成功地分離培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)。 3.紅骨髓上清液能顯著促進(jìn)BMSCs細(xì)胞增殖。 4.紅骨髓上清液能顯著增加成骨分化BMSCs的ALP含量。 5.紅骨髓上清液能誘導(dǎo)BMSCs成骨分化。
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【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R329.24

【引證文獻(xiàn)】

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本文編號：1594357