本文選題：惡性瘧原蟲　切入點(diǎn)：多表位疫苗　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：瘧疾是當(dāng)今世界三大傳染性疾病之一。根據(jù)WHO最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,2009年全球2.25億人感染瘧疾,有78.1萬人因其死亡,而且大多數(shù)是5歲以下兒童和孕婦[1]。在所有瘧原蟲中,惡性瘧是危害最嚴(yán)重、致死率最高的一種。在瘧疾控制的過程中不斷出現(xiàn)惡性瘧原蟲及按蚊抗藥性,這就加劇了人們對(duì)于預(yù)防性和治療性瘧疾疫苗的需求。由于瘧原蟲生活周期復(fù)雜,抗原具有階段特異性、蟲株差異性和高度變異性等特點(diǎn),目前針對(duì)單個(gè)抗原或表位的疫苗在相關(guān)實(shí)驗(yàn)中未取得較好的效果,因此多表位嵌合疫苗就成為研究抗瘧疫苗的熱點(diǎn)[2]。 本課題組前期工作中,我們利用表位隨機(jī)重組技術(shù)構(gòu)建了多表位基因庫[3],并用庫免疫血清篩選出免疫原性最佳、穩(wěn)定性最好的人工隨機(jī)組合抗原M.RCAg-1和M.RCAg-3.用弗氏佐劑在小鼠和新西蘭兔動(dòng)物模型中證實(shí)二者具有較強(qiáng)的免疫原性并可在體外抑制惡性瘧原蟲的生長(zhǎng)(Growth Inhibi tion Assay.GIA).換用佐劑Montanide ISA51(Seppic,France)免疫恒河猴后發(fā)現(xiàn)局部刺激性較大。因此,本研究目的是選擇新的抗原佐劑使M.RCAg-1和M.RCAg-3能順利用于臨床觀察.本研究在前期工作的基礎(chǔ)上,根據(jù)第二代多表位嵌合抗原疫苗M.RCAg-3的理化性質(zhì),利用陰離子交換柱、疏水作用層析柱和分子篩,摸索總結(jié)出了第二代多表位嵌合抗原疫苗M.RCAg-3的純化步驟。并且選用了有臨床應(yīng)用前景或正在臨床應(yīng)用的佐劑(CpG.Al.AD.ADL)與M.RCAg-1和M.RCAg-3配伍,以提高其免疫原性。還用納米粒包裹蛋白或蛋白加佐劑來免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,以探索新的抗原遞呈途徑,增加抗原的免疫原性。通過對(duì)不同組別免疫效果的評(píng)價(jià)來分析其相應(yīng)的佐劑效應(yīng)。最終選擇ADL和AD分別與M.RCAg-1和M.RCAg-3配伍免疫大白兔,驗(yàn)證其抗體的體外保護(hù)效果。 主要取得以下進(jìn)展： 1.摸索出純化第二代多表位嵌合抗原疫苗M.RCAg-3的純化步驟,最終純化結(jié)果可達(dá)到98.8%。 2.篩選與M.RCAg-1和M.RCAg-3相配伍的佐劑。佐劑ADL和AD分別能顯著增強(qiáng)M.RCAg-1和M.RCAg-3免疫反應(yīng)。而佐劑CpG和CpGA1增強(qiáng)抗原免疫反應(yīng)的能力相對(duì)較弱。初步確定用納米包裹遞呈蛋白的方法不適合M.RCAg-1和M.RCAg-3。 3. M. RCAg-1(小試)、M.RCAg-1(中試)和M.RCAg-3分別與佐劑ADL AD1和AD配伍免疫大白兔后,總IgG和特異性IgG的GIA水平接近WHO規(guī)定的陽性對(duì)照抗體的體外生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)(GIA)水平。
[Abstract]:Malaria is one of the three most infectious diseases in the world today. According to the latest WHO statistics, in 2009, 225 million people worldwide were infected with malaria, 781,000 people died from malaria, and most of them were children under the age of five and pregnant women. [1] of all malaria parasites, Falciparum malaria is one of the most harmful and lethal species. Plasmodium falciparum and Anopheles mosquito resistance continue to occur during malaria control. This has increased the demand for preventive and therapeutic malaria vaccines. Due to the complexity of the life cycle of Plasmodium, the antigens are phase specific, the strain diversity and high variability, and so on. At present, the single antigen or epitope vaccine has not achieved good results in related experiments, so multi-epitope chimeric vaccine has become a hot spot in the research of antimalarial vaccine [2]. In our earlier work, we constructed a multiepitope gene bank by using epitope random recombination technique, and screened out the best immunogenicity by using library immune serum. M. RCAg-1 and M.RCAg-3. the best artificial random combinations of antigens M.RCAg-1 and M.RCAg-3. Freund's adjuvants were used in mice and New Zealand rabbits to confirm their strong immunogenicity and to inhibit the growth of Plasmodium falciparum Inhibi tion Assay.GIAA in vitro. The rhesus monkey was immunized with Montanide ISA51 and Seppica France. The aim of this study was to select a new antigen adjuvant so that M.RCAg-1 and M.RCAg-3 could be used in clinical observation successfully. Based on the previous work, based on the physicochemical properties of the second generation multiepitope chimeric antigen vaccine M.RCAg-3, the anion exchange column was used. The purification steps of the second generation multiepitope chimeric antigen vaccine M.RCAg-3 were summarized by hydrophobic interaction chromatography column and molecular sieve, and the adjuvant CpG.Al.AD.ADL, which has clinical application prospect or is in clinical use, was selected to be compatible with M.RCAg-1 and M.RCAg-3. In order to improve its immunogenicity, the experimental animals were immunized with nanoparticles encapsulated protein or protein and adjuvant to explore new ways of presenting antigen. The immunogenicity of antigens was increased. The adjuvant effect was analyzed by evaluating the immune effects of different groups. Finally, ADL and AD were selected to match M.RCAg-1 and M.RCAg-3 to immunize rabbits in vitro to verify the protective effect of their antibodies in vitro. The following progress has been made:. 1. The purification steps of the second generation multiepitope chimeric antigen vaccine M.RCAg-3 were found, and the final purification result was 98.8%. 2. Screening adjuvants compatible with M. RCAg-1 and M.RCAg-3. Adjuvant ADL and AD could significantly enhance the immunoreaction of M.RCAg-1 and M.RCAg-3, respectively. The ability of adjuvant CpG and CpGA1 to enhance the immunoreaction of antigen was relatively weak. The method is not suitable for M.RCAg-1 and M.RCAg-3. 3. After inoculating rabbits with adjuvant ADL AD1 and AD respectively, the GIA levels of total IgG and specific IgG of M. RCAg-1 (pilot-scale test) and M.RCAg-3 were close to the in vitro growth inhibition test (GIA) of the positive control antibody specified by WHO.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1592862