本文選題：沙眼衣原體　切入點：小鼠模型　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis)是專性細胞內(nèi)寄生的具有特殊生活周期的原核微生物,人感染沙眼衣原體后會出現(xiàn)一系列的臨床疾病,其D-K血清型引起的泌尿生殖系統(tǒng)感染是目前最常見的性傳播疾病。對于女性感染者,衣原體感染雖沒有明顯的臨床表現(xiàn),卻又特異性地損害生殖管道的柱狀上皮細胞,與陰道炎、宮頸炎,子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎、盆腔炎、不孕、流產(chǎn)等存在一定的相關(guān)性。目前全世界每年約有9300萬新發(fā)病例,我國的新發(fā)病例也有逐年增加的趨勢,衣原體的生殖道感染作為一個公共衛(wèi)生問題值得關(guān)注。 沙眼衣原體的生殖道感染動物模型的研究有助于對衣原體造成的人類疾病病理損傷機制的理解。基于E型沙眼衣原體在衣原體感染生殖道所致疾病中臨床檢出率最高,本課題建立了血清E型衣原體下生殖道感染的小鼠模型。首先在體外經(jīng)感染靶細胞HeLa229擴增了沙眼衣原體,確定了衣原體體外擴增的時效關(guān)系；通過低、中、高三個感染劑量組生殖道灌注造成BALB/c小鼠的感染,測定了感染后3、7、14、21、28天多項指標,包括體重等臨床指標；病理學(xué)檢測；陰道和宮頸的拭子樣品的衣原體分離培養(yǎng)；宮頸組織樣品的核酸定量分析;血清抗體和IFN-γ、IL-2、IL-10等細胞因子的測定,以此建立標準化的模型評價指標體系。 OMP1基因(class 1 outer membrane protein gene)是衣原體病原體特異的基因,我們以此基因為靶基因測定衣原體在感染組織中的數(shù)量,了解病原復(fù)制與其他指標的相互關(guān)系,實驗中采用蛋白裂解和鹽析沉淀的方法提取組織樣品的DNA,建立了Real time PCR體系,在體系中排除了小鼠基因組的干擾,可以定量精確組織樣品中的衣原體數(shù)量。此方法提高了衣原體檢測的敏感性和特異性。 我們的研究首先確定了體外衣原體的復(fù)制規(guī)律,制備了純度較高的感染用衣原體。三種劑量感染小鼠后的宮頸拭子均可以分離得到衣原體病原體,組織核酸定量確定了衣原體在感染組織的復(fù)制和增殖。感染小鼠的臨床指標和病理分析也確證了衣原體感染的臨床和病理變化。在分析了感染小鼠的外周血后發(fā)現(xiàn)小鼠的抗衣原體抗體在第2周開始增高,之后抗體水平維持平穩(wěn)狀態(tài)。IFN-γ、IL-2和IL-10的變化表明了小鼠在感染衣原體后機體出現(xiàn)了針對病原體的不同免疫反應(yīng)及相關(guān)因子的變化。 本研究構(gòu)建了穩(wěn)定的人型株沙眼衣原體小鼠下生殖道感染模型,其中中、高劑量感染組在病原學(xué)、病理學(xué)指標上與人感染后臨床表現(xiàn)高度相似,感染均以宮頸炎為主,伴隨輕度的陰道炎,但在免疫學(xué)指標上與人感染后有差異,小鼠模型感染后的自然清除時間較短,只能引起短暫的下生殖道感染。 通過模型構(gòu)建過程中的標準化研究,我們確立了衣原體體外擴增培養(yǎng)、核酸定量、感染接種、感染后取材以及感染后檢測包括病原學(xué)、病理學(xué)和免疫學(xué)在內(nèi)的多項指標的方法,分析了不同感染劑量對于這些指標的影響,初步建立了標準化的操作規(guī)程(SOP),這些可以為今后建立各類衣原體生殖道感染模型提供一定的依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R-332

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 劉淼;張洪文;李曉玲;鄧亞麗;陳婕;劉曉飛;;不良妊娠女性162例生殖道中解脲脲原體生物一群的分布狀況研究[J];湘南學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2008年01期

2 劉春利;蘇玉芬;阮學(xué)雨;農(nóng)珍;;解脲支原體感染引起不育的檢測分析[J];檢驗醫(yī)學(xué)與臨床;2008年02期

3 劉天華;;解脲支原體感染與輸卵管性不孕的相關(guān)性探討[J];檢驗醫(yī)學(xué)與臨床;2008年24期

4 陸春,朱國興,黃懷球;解脲支原體對子宮頸致病性的臨床分析[J];臨床皮膚科雜志;2002年03期

5 王碧霞;祝擷英;徐蓓;;女童解脲支原體感染狀況調(diào)查分析[J];中國婦幼健康研究;2008年05期

6 楊慧霞;妊娠合并生殖道沙眼衣原體感染和支原體感染[J];中國實用婦科與產(chǎn)科雜志;2003年12期

7 張月蓮,楊燕生;解脲支原體感染與輸卵管性不孕的關(guān)系[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2000年02期

8 鄧玉清,吳瑞芳,郭燕燕,王玉潔,劉志紅;病原體及巨細胞病毒感染與輸卵管妊娠的關(guān)系[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2004年02期

9 幸彩梅;;解脲支原體與女性宮頸炎陰道炎的相關(guān)分析[J];中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志;2009年01期

，

本文編號：1592267