本文選題：Crisp-　切入點：避孕　出處：《生殖醫(yī)學雜志》2016年10期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的構(gòu)建以殼聚糖納米微球為載體的Crisp1DNA疫苗,對其物理學、生物學活性進行測定,并評估其在COS-7細胞中的表達情況及細胞毒性。方法采用本實驗室前期構(gòu)建的真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1-Crisp1,以復凝法制備載Crisp1DNA疫苗的殼聚糖納米粒(CS/DNA NPs),用透射電鏡以及凝膠阻滯分析對其相關(guān)物理學、生物學活性進行測定,然后將載Crisp1DNA疫苗的殼聚糖納米粒轉(zhuǎn)染至COS-7細胞,檢測其細胞毒性,并用間接免疫熒光法鑒定其在細胞內(nèi)的表達情況。結(jié)果透射電鏡結(jié)果顯示納米粒形態(tài)較均一,平均粒徑為189.3nm,Zeta電位約為+0.2mV。凝膠阻滯分析顯示殼聚糖微�？蓪NA疫苗完全阻滯于加樣孔中并保護DNA質(zhì)粒不降解。MTT試驗顯示殼聚糖組細胞存活率顯著高于脂質(zhì)體組(P0.01)。間接免疫熒光實驗結(jié)果顯示CS/DNA NPs能在COS-7細胞中有效表達Crisp 1抗原蛋白。結(jié)論由殼聚糖納米微球介導的Crisp1DNA疫苗,可在真核細胞中有效地表達,且具有較小的細胞毒性,為進一步發(fā)展安全有效的DNA避孕疫苗打下了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to construct a Crisp1DNA vaccine based on chitosan nanospheres and determine its physical and biological activities. Methods the eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1-Crisp1, constructed in our laboratory, was used to prepare the chitosan nanoparticles containing Crisp1DNA vaccine. Transmission electron microscopy (TEM) and gel arrest were used to block the expression and cytotoxicity of the recombinant plasmid pcDNA3.1-Crisp1.Methods the expression and cytotoxicity of the recombinant plasmid pcDNA3.1-Crisp1 were evaluated in COS-7 cells. Analysis of its related physics, The biological activity was measured, and then the chitosan nanoparticles loaded with Crisp1DNA vaccine were transfected into COS-7 cells to detect their cytotoxicity. Results the results of transmission electron microscope showed that the morphology of nanoparticles was uniform. The average particle size was 189.3 nm 路DNA potential was about 0.2 MV. Gel block analysis showed that chitosan particles could block the DNA vaccine completely in the sample hole and protect DNA plasmid from degradation. MTT test showed that the cell survival rate of chitosan group was significantly higher than that of liposome group. The results of indirect immunofluorescence assay showed that CS/DNA NPs could effectively express Crisp1 antigen protein in COS-7 cells. It can be expressed effectively in eukaryotic cells and has less cytotoxicity, which lays the foundation for the further development of safe and effective DNA contraceptive vaccine.
【作者單位】： 武漢大學人民醫(yī)院生殖醫(yī)學中心;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81501306)
【分類號】：R392

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本文編號：1591801