發(fā)布時間：2018-03-09 12:17

  本文選題：周期性張應變　切入點：HUVECs　出處：《上海交通大學》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：內(nèi)皮細胞(endothelial cells, ECs)作為血管壁主要細胞成分之一,其功能狀態(tài)對于保持血管正常結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定極為重要。研究顯示,血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)和功能失調(diào)將引發(fā)一系列級聯(lián)反應,對于動脈粥樣硬化、冠心病、心肌梗死和中風等心血管疾病的發(fā)生發(fā)展具有重要作用。ECs在血管中受到血流切應力和周期性張應變作用。血液動力學因素在血管重建中起重要作用,參與調(diào)控血管細胞分化、遷移、增殖和凋亡等功能。研究周期性張應變對ECs增殖的影響及其機制,對于探討血管重建的力學生物學機制有重要的意義。 本文應用FX-4000T細胞張應變加載系統(tǒng),對體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)施加10 %周期性張應變,頻率為1.25 Hz,加載時間分別為12、24、48和72 h,以靜態(tài)HUVECs為對照組。用CCK-8檢測HUVECs增殖, Western blotting檢測相關(guān)蛋白表達水平的變化;抑制劑或RNA干擾阻斷可能的信號調(diào)節(jié)分子的活性或表達,觀察其對HUVECs增殖的影響和SIRT6、IGF-1、p-NFκB和p-Akt等信號分子表達的變化,以探討生理范圍周期性張應變影響HUVECs增殖的分子機制。 結(jié)果顯示:①施加10%-1.25Hz周期性張應變12 h和24 h可以促進HUVECs增殖;②24 h周期性張應變加載降低HUVECs的SIRT6蛋白表達水平,而IGF-1、p-NFκB、p-Akt表達量上升。③SIRT6 RNA干擾促進HUVECs增殖,同時p-Akt水平上升,但IGF-1和p-NFκB的表達水平無明顯差異;④IGF-1刺激上調(diào)了HUVECs增殖,同時上調(diào)其p-NFκB和p-Akt表達,而SIRT6表達無明顯變化。⑤IGF-1 RNA干擾下調(diào)了HUVECs增殖以及p-NFκB和p-Akt表達,但SIRT6表達無顯著變化。⑥Bay 11-7082處理HUVECs抑制其p-NFκB表達水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)SIRT6與p-Akt的表達也被下調(diào),而IGF-1表達水平無顯著差異。Wortmannin處理HUVECs后,其p-Akt表達被顯著抑制,但是SIRT6、IGF-1和p-NFκB的表達未見明顯差異。 上述結(jié)果表明,生理范圍的周期性張應變促進了HUVECs增殖,其機制可能是張應變通過促進HUVECs的IGF-1分泌,和下調(diào)SIRT6表達,而SIRT6又通過PI3K/Akt信號通路參與調(diào)控HUVECs的增殖。
[Abstract]:Endothelial cells (ECs) as one of the main cell components of vascular wall, its functional state is very important to maintain the stability of normal structure and function of vascular. For atherosclerosis, coronary heart disease, The occurrence and development of cardiovascular diseases such as myocardial infarction and stroke play an important role. ECs are subjected to shear stress and periodic tension strain in blood vessels. Hemodynamic factors play an important role in vascular remodeling and play an important role in regulating the differentiation of vascular cells. Effects of cyclic tensile strain on proliferation of ECs and its mechanism are studied. It is of great significance to study the mechanics and biological mechanism of vascular remodeling. In this paper, 10% cyclic strain was applied to cultured human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) by FX-4000T cell strain loading system. The frequency was 1.25 Hz and the loading time was 12 ~ 24 ~ 48 h and 72 h, respectively. Static HUVECs was used as control group. HUVECs proliferation was detected by CCK-8 and the expression level of related protein was detected by Western blotting. Inhibitor or RNA interference blocked the activity or expression of possible signal regulating molecules. The effects on HUVECs proliferation and the expression of signaling molecules such as SIRT6 IGF-1, p-NF 魏 B and p-Akt were observed in order to explore the molecular mechanism of cyclic tensile strain affecting the proliferation of HUVECs in physiological range. The results showed that the proliferation of HUVECs was stimulated by the cyclic strain of 10 ~ 1.25Hz for 12 h and 24 h respectively. The expression of SIRT6 protein in HUVECs was decreased by cyclic strain loading at 224h, while the expression of SIRT6 protein was increased by the interference of IGF-1, p-NF 魏 B, p-Akt. 3SIRT6 RNA interference promoted the proliferation of HUVECs, and the level of p-Akt increased. However, there was no significant difference between the expression of IGF-1 and p-NF 魏 B. 4IGF-1 stimulated the proliferation of HUVECs and up-regulated the expression of p-NF 魏 B and p-Akt, while the expression of SIRT6 did not change significantly .5IGF-1 RNA interfered with the down-regulation of HUVECs proliferation and p-NF 魏 B and p-Akt expression. However, there was no significant change in the expression of SIRT6 in HUVECs treated with .6 Bay 11-7082. The results showed that the expression of p-Akt was also down-regulated by SIRT6 and p-Akt. However, there was no significant difference in the expression of IGF-1 between SIRT6 and p-Akt. The expression of p-Akt was significantly inhibited after HUVECs was treated with wortmannin. However, there was no significant difference between the expression of IGF-1 and p-NF 魏 B in SIRT6. These results suggest that cyclic tensile strain in physiological range promotes the proliferation of HUVECs. The mechanism may be that tensor strain promotes IGF-1 secretion and down-regulates the expression of SIRT6 in HUVECs, while SIRT6 participates in the regulation of HUVECs proliferation through PI3K/Akt signaling pathway.
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R329

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