本文選題：腸道病毒71型　切入點：甲型肝炎病毒　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的初步評價腸道病毒71型(Enterovirus 71, EV71)、甲型肝炎(甲肝)病毒(Hepatitis A, HAV)與乙型肝炎(乙肝)病毒(Hepatitis B, HBV)聯(lián)合疫苗中三種抗原之間的相互作用及其免疫小鼠誘導(dǎo)的特異性免疫應(yīng)答水平。方法將EV71滅活疫苗抗原、HAV滅活疫苗抗原及重組HBV疫苗抗原(HBsAg)按常規(guī)劑量,以直接吸附法吸附AI(OH)3佐劑,配制成EV71-HAV-HBV聯(lián)合疫苗,并設(shè)二聯(lián)疫苗組、單苗組、佐劑對照組和空百對照組(PBS)。分別于0、28d各經(jīng)腓腸肌免疫BALB/c小鼠一次,于初免后2、4周和第二劑免疫后2、4、8、16、28周經(jīng)尾動脈采血,分離血清。采用微量中和試驗檢測血清EV71中和抗體效價；采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)檢測血清中Anti-HBs、Anti-HAV水平。于初免后3、4周和第二劑免疫后第1、2、4周經(jīng)尾動脈采血,用流式細胞儀檢測小鼠全血中淋巴細胞亞群CD4+/CD8+的百分率及小鼠血清中TNF、IFNy、IL-5、IL-4、IL-2含量,同時取小鼠脾臟,分離得到脾單個核細胞(mononuclear cell, MNC),采用酶聯(lián)免疫斑點試驗(enzyme-linked immunospot assay, ELISPOT)檢測MNC中抗原特異性FNy的分泌水平。結(jié)果各疫苗組小鼠血清Anti-HBs和Anti-HAV陽轉(zhuǎn)率分別在第二劑免疫后第2周和第4周達100%,EV71中和抗體只有部分組達到100%；佐劑對照組和空白對照組抗體均無陽轉(zhuǎn)。初免后第4周,疫苗組CD3+、CD4+細胞百分率較高,第5周均有不同程度的下降；CD8+細胞百分率第3周最高,第4周有不同程度的下降。第二劑免疫后第1周,三聯(lián)疫苗組5種細胞因子水平較其他組高,提示三聯(lián)疫苗組在第二次抗原刺激時能較早的產(chǎn)生細胞因子相關(guān)的免疫應(yīng)答。各疫苗組分泌IFNy的斑點形成細胞(spot forming cell, SFC)數(shù)在5個檢測時點有所波動,第二劑免疫后第1周,HBsAg多肽和EV71全病毒刺激產(chǎn)生的IFNγ分泌陽轉(zhuǎn)率均達到100%,同時SFC數(shù)也達到峰值；HAV全病毒刺激產(chǎn)生的IFN-γ水平在5個時間點的檢測結(jié)果均為陰性；佐劑和空白對照組的ELISPOT檢測結(jié)果均為陰性。結(jié)論一定劑量的EV71-HAV-HBV聯(lián)合疫苗具有較好的免疫原性,可迅速誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生良好的體液免疫應(yīng)答和一定水平的細胞免疫應(yīng)答,三種抗原間未發(fā)現(xiàn)相互作用。
[Abstract]:Objective to evaluate the interaction between enterovirus 71, EV71, hepatitis A virus hepatitis A (HAV) and hepatitis B (HBV) vaccine and the specificity of immunizing mice. Methods EV71 inactivated vaccine antigen and recombinant HBV vaccine antigen were used in routine dose. A combined EV71-HAV-HBV vaccine was prepared by adsorption of AI(OH)3 adjuvant by direct adsorption. The mice were divided into two groups: single vaccine group, single vaccine group, adjuvant control group and blank 100 control group. BALB/c mice were immunized with gastrocnemius muscle on day 0 and 28, respectively. Blood samples were collected from caudal artery at the 4th week after the first immunization and 2 weeks after the second dose immunization. The neutralizing antibody titers of serum EV71 were detected by microneutralization test. Enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) was used to detect the level of Anti-HBsAg Anti-HAV in serum. Blood samples were collected from caudal artery at 3 ~ 4 weeks after immunization and 1 ~ 2 ~ 4 weeks after the second dose immunization. Flow cytometry was used to detect the percentage of CD4 / CD8 in the whole blood of mice and the level of IL-2 in serum of mice. The spleen of the mice was taken at the same time. Splenic mononuclear cells (MNCs) were isolated and detected by enzyme-linked immunospot assay (ElisPOT) for the secretion of antigen-specific FNy in MNC. Results the serum Anti-HBs and Anti-HAV positive conversion rates of mice in each vaccine group were determined in the second dose after the second dose immunization. At week 1 and week 4, the neutralizing antibody against EV71 was only partially divided into 100 parts, while the antibody in the adjuvant control group and the blank control group had no positive change. At the fourth week after the first immunization, no positive changes were found in the adjuvant control group and blank control group. In the vaccine group, the percentage of CD4 cells of CD3 was higher, the percentage of CD8 cells decreased in different degrees at the 5th week, the percentage of CD8 cells decreased at the 3rd week and decreased at the 4th week, and decreased at the first week after the second dose immunization. The levels of 5 cytokines in the triple vaccine group were higher than those in the other groups. The results indicated that the triplex vaccine group could produce cytokine related immune response earlier during the second antigen stimulation. The number of spot forming cells that secreted IFNy in each vaccine group fluctuated at 5 test time points. In the first week after the second dose of immunization, the positive conversion rate of IFN 緯 was 100, and the number of SFC reached the peak value. The level of IFN- 緯 produced by the whole virus stimulation was negative at 5 time points. The results of ELISPOT detection in adjuvant and blank control group were negative. Conclusion certain dose of EV71-HAV-HBV combined vaccine has good immunogenicity and can induce a good humoral immune response and a certain level of cellular immune response in mice. No interaction was found among the three antigens.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R392-33

【共引文獻】

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本文編號：1567314