本文關(guān)鍵詞： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 成骨誘導(dǎo) 組織工程 構(gòu)建　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(human bone mesenchymal stem cells,BMSCs)是組織工程骨目前最常用的種子細(xì)胞,BMSCs構(gòu)建組織工程骨(tissue engineering bone,TEB)的量效關(guān)系是TEB臨床應(yīng)用中的重要問(wèn)題,但是目前尚未見明確報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究了hBMSCs體外成骨誘導(dǎo)不同時(shí)間點(diǎn)的成骨相關(guān)基因表達(dá)和體外傳代對(duì)hBMSCs干細(xì)胞表面標(biāo)志表達(dá)、增殖和分化能力的影響,并通過(guò)不同濃度hBMSCs構(gòu)建TEB的體外觀察及不同數(shù)量hBMSCs構(gòu)建TEB的體內(nèi)異位成骨研究,對(duì)hBMSCs構(gòu)建TEB的量效關(guān)系進(jìn)行了初步探討。 方法： 1、密度梯度離心法分離hBMSCs,應(yīng)用流式細(xì)胞檢測(cè)、成骨及成脂誘導(dǎo)分化進(jìn)行干細(xì)胞鑒定。 2、對(duì)hBMSCs進(jìn)行體外成骨誘導(dǎo)分化,應(yīng)用RT-PCR法對(duì)體外成骨誘導(dǎo)不同時(shí)間點(diǎn)的成骨相關(guān)基因表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。 3、對(duì)hBMSCs進(jìn)行體外傳代擴(kuò)增培養(yǎng),應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)、MTT法和細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)不同代數(shù)hBMSCs的干細(xì)胞表面標(biāo)志和增殖能力；應(yīng)用Real-time PCR法和油紅0染色檢測(cè)不同代數(shù)hBMSCs的成骨和成脂分化能力。 4、使用不同濃度hBMSCs接種β-TCP支架,應(yīng)用掃描電鏡(SEM)、組織學(xué)染色(HE)和Real-time PCR法檢測(cè)不同濃度hBMSCs在β-TCP支架上的生長(zhǎng)和成骨分化情況。 5、使用相同濃度不同體積hBMSCs接種β-TCP支架構(gòu)建組TEB并植入裸鼠皮下,應(yīng)用組織學(xué)檢測(cè)其體內(nèi)異位成骨情況。 結(jié)果： 1、hBMSCs的生物學(xué)特性：密度梯度離心、貼壁篩選結(jié)合消化控制法分離得到的hBMSCs表達(dá)干細(xì)胞表面標(biāo)志：CD90、CD29、CD166、CD44、CD73、CD1O5,在體外可分化為成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞。 2、hBMSCs體外成骨誘導(dǎo)：成骨相關(guān)基因在誘導(dǎo)早期部分表達(dá),中期均有表達(dá),基因表達(dá)大部分在14天達(dá)高峰,與礦化相關(guān)的基因表達(dá)在21天達(dá)高峰。 3、hBMSCs體外傳代培養(yǎng)：P4代以后的hBMSCs的增殖能力、成脂和成脂分化能力減弱。 4、hBMSCs構(gòu)建TEB的體外研究：高濃度組(10×106和20×106cell/ml) hBMSCs在β-TCP支架的生長(zhǎng)和基質(zhì)分泌情況優(yōu)于低濃度組(1×106和5×106cell/ml)。不同濃度組的成骨分化水平無(wú)明顯差異。 5、hBMSCs構(gòu)建的TEB的體內(nèi)研究：相同濃度的hBMSCs接種β-TCP支架構(gòu)建的TEB,接種體積增加,體內(nèi)成骨成功率增加。 結(jié)論： 密度梯度離心、貼壁篩選結(jié)合消化控制法可成功分離hBMSCs。hBMSCs體外成骨誘導(dǎo)過(guò)程中成骨相關(guān)基因呈動(dòng)態(tài)表達(dá),其表達(dá)時(shí)序與成骨細(xì)胞生理發(fā)育基本相似;Passage 5 (P5)代之前的hBMSCs增殖和分化能力較強(qiáng),適宜臨床選用；10×106和20×106cell/ml是hBMSCs接種β-TCP支架的適宜濃度；TEB體內(nèi)成骨成功率隨hBMSCs的接種數(shù)量增加而增加。hBMSCs構(gòu)建組織工程骨的量效參數(shù)能夠?yàn)榻M織工程骨的進(jìn)一步研究及臨床應(yīng)用提供參考。
[Abstract]:Objective:
Bone marrow mesenchymal stem cells (human bone mesenchymal stem cells, BMSCs) is the most commonly used bone tissue engineering seed cells to construct tissue engineering bone BMSCs (tissue engineering bone, TEB) of the dose-response relationship is an important issue in the clinical application of TEB, but has not been reported at present. The experimental study of hBMSCs in vitro osteogenic induction at different time points into passages on hBMSCs expression of stem cell surface markers of bone related gene expression and body, influence the proliferation and differentiation ability, and by different concentrations of hBMSCs in vitro and in vivo ectopic construction of different numbers of hBMSCs TEB to construct TEB osteogenesis, the dose effect relation of the construction of TEB hBMSCs a preliminary study.
Method錛，

本文編號(hào)：1542479