組織化學(xué)染色與免疫電鏡雙標(biāo)記方法在檢測大鼠腦干前包欽格復(fù)合體細(xì)胞色素氧化酶活性中的應(yīng)用
本文關(guān)鍵詞: 細(xì)胞色素氧化酶 組織化學(xué)染色 免疫電鏡 神經(jīng)激肽受體 前包欽格復(fù)合體 大鼠 出處:《細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志》2017年09期 論文類型:期刊論文
【摘要】:目的研究腦干前包欽格復(fù)合體(pre-B9t C)細(xì)胞色素氧化酶(COX)的活性變化。方法采用COX的組織化學(xué)染色與pre-B9t C的標(biāo)記物神經(jīng)激肽1受體(NK1R)納米金-銀加強(qiáng)免疫組織化學(xué)染色雙標(biāo)法,進(jìn)行pre-B9t C特定神經(jīng)核團(tuán)尤其是不同亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的COX活性檢測,并進(jìn)行COX活性的半定量分析。結(jié)果光鏡下NK1R免疫反應(yīng)性(NK1R-ir)產(chǎn)物主要分布于pre-B9t C神經(jīng)細(xì)胞膜,清晰勾勒神經(jīng)元輪廓,COX組織化學(xué)染色呈棕色,彌漫表達(dá)于NK1R-ir神經(jīng)元胞質(zhì)及突起內(nèi)。電鏡下NK1R-ir金顆粒主要分布于pre-B9t C神經(jīng)元胞體和樹突膜內(nèi)表面,胞質(zhì)內(nèi)也可見金顆粒標(biāo)記。pre-B9t C神經(jīng)元不同亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)(胞體、軸突終末、樹突)線粒體的形狀和分布均有不同,在胞體和軸突終末線粒體多為圓形和橢圓形,在樹突則以長桿狀線粒體多見,胞體線粒體多為管泡狀嵴,而板層嵴線粒體以軸突終末和樹突多見。軸突終末內(nèi)線粒體多聚集分布,樹突內(nèi)線粒體多近胞膜散在分布,但在突觸部位,線粒體分布密集,且局部膨大接近突觸后膜,這與突觸的信息傳遞功能需要大量ATP產(chǎn)生密切相關(guān)。COX活性反應(yīng)產(chǎn)物分布于線粒體嵴上,線粒體嵴電子密度不同表明COX活性不同。軸突終末和樹突線粒體COX活性明顯高于胞體。結(jié)論 pre-B9t C神經(jīng)元不同亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)能量代謝不同,其中軸突終末和樹突線粒體COX活性明顯高于胞體,尤其突觸部位線粒體分布密集,且表達(dá)高COX活性。將COX組織化學(xué)技術(shù)和免疫電鏡技術(shù)相結(jié)合,為檢測區(qū)域性COX活性,尤其是區(qū)域內(nèi)不同亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的COX活性提供了新方法。
[Abstract]:Objective to study the changes of cytochrome oxidase (COXX) activity in pre-B9t C (pre-B9t C) brain-stem cells. Methods COX histochemical staining and pre-B9t C labeled neurokinin 1 receptor NK1R nano-gold and silver enhanced immunocytochemical staining were used. The activity of COX in specific nuclei of pre-B9t C, especially in different subcellular structures, and semi-quantitative analysis of COX activity were carried out. Results the products of NK1R immunoreactive NK1R-irwere mainly distributed in the membrane of pre-B9t C nerve cells under light microscope. The histochemical staining of Cox was brown and distributed in the cytoplasm and processes of NK1R-ir neurons. Under electron microscope, NK1R-ir gold granules were mainly distributed in the cell body of pre-B9t C neurons and the inner surface of dendritic membrane. It was also found that the shape and distribution of mitochondria in pre-B9t C neurons (cell body, axon terminal, dendrite) were different in cytoplasm. The mitochondria were round and oval in the cytoplasm and axon terminal mitochondria. In dendrites, the long rod mitochondria are more common, the mitochondria in the cell body are tubular vesicular cristae, while the lamellar mitochondria are axon terminals and dendrites, the mitochondria in the dendritic terminals are mostly clustered, and the mitochondria in the dendrites are dispersed near the cellular membrane. However, at the synaptic site, the mitochondria are densely distributed and the local swelling is close to the postsynaptic membrane, which is closely related to the production of a large number of ATP activity products on the mitochondrial crest, which is closely related to the information transmission function of the synapse. The mitochondrial crest electron density indicated that COX activity was different. The COX activity of axon terminal and dendritic mitochondria was significantly higher than that of cell body. Conclusion the energy metabolism of pre-B9t C neurons is different in different subcellular structures. The COX activity of axon terminal and dendritic mitochondria was significantly higher than that of the cell body, especially the mitochondria in synaptic sites were densely distributed and expressed high COX activity. COX histochemistry and immunoelectron microscopy were combined to detect the regional COX activity. In particular, the COX activity of different subcellular structures in the region provides a new method.
【作者單位】: 第四軍醫(yī)大學(xué)神經(jīng)生物學(xué)教研室;第四軍醫(yī)大學(xué)病理與病理生理學(xué)教研室;
【基金】:國家自然科學(xué)基金(31171102,31471097)
【分類號】:R338
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本文編號:1529186
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