本文關(guān)鍵詞： 模擬微重力 肝干細(xì)胞 三維培養(yǎng) 旋轉(zhuǎn)式生物反應(yīng)器 微載體　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)》2011年08期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:探討微重力環(huán)境對肝干細(xì)胞增殖及分化的影響。方法:從人肝組織中分離、培養(yǎng)肝干細(xì)胞,進(jìn)行肝干細(xì)胞鑒定后,分別進(jìn)行平面培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)、模擬微重力下三維培養(yǎng)。利用倒置相差顯微鏡、掃描電鏡觀察不同培養(yǎng)條件下細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;檢測上清液中葡萄糖消耗量和乳酸脫氫酶含量以比較細(xì)胞增殖和活性情況;熒光定量PCR法檢測細(xì)胞ALB、EpCAM、CK19、AFP、HNF6、CYP3A4、CYP3A7 mRNA表達(dá)變化。結(jié)果:模擬微重力環(huán)境下,肝干細(xì)胞以微載體球面為基底呈三維立體結(jié)構(gòu)生長,形成大小不等細(xì)胞團(tuán);掃描電鏡下見細(xì)胞團(tuán)表面有豐富的細(xì)胞外基質(zhì)及微絨毛;從9 d開始葡萄糖消耗量明顯增加,至17 d達(dá)高峰,而LDH含量始終保持低水平;培養(yǎng)至21 d細(xì)胞仍高表達(dá)EpCAM、ALB、CK19、HNF6、CYP3A7,不表達(dá)AFP、CYP3A4,符合肝干細(xì)胞表型特征,與微載體培養(yǎng)結(jié)果相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:模擬微重力環(huán)境能促進(jìn)肝干細(xì)胞呈三維立體結(jié)構(gòu)生長,有利于細(xì)胞快速增殖并維持細(xì)胞活性和表型。
[Abstract]:Objective: to investigate the effect of microgravity on the proliferation and differentiation of hepatic stem cells. Using inverted phase contrast microscope, scanning electron microscope was used to observe the morphological changes of cells in different culture conditions, glucose consumption and lactate dehydrogenase content in supernatant were measured to compare cell proliferation and activity. Fluorescence quantitative PCR assay was used to detect the expression of CYP3A7 mRNA in ALBN EpCAMN CK19. Results: in simulated microgravity environment, liver stem cells grew on the substrates of microcarriers and formed cell clusters of different sizes. Under scanning electron microscope, there were abundant extracellular matrix and microvilli on the surface of the cell mass, and the glucose consumption increased significantly from 9 days to the peak at 17 days, while the content of LDH remained low. The HNF6CYP3A7 was still highly expressed in the cells cultured for 21 days, and no AFPhCYP3A4 was expressed, which was consistent with the phenotypic characteristics of hepatic stem cells. Compared with the results of microcarrier culture, there was a significant difference (P 0.05). Conclusion: the simulated microgravity environment can promote the growth of liver stem cells in three-dimensional structure. It is beneficial to the rapid proliferation of cells and the maintenance of cell activity and phenotype.
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染病科;
【基金】：江蘇省衛(wèi)生廳面上項目(H200909) 江蘇省衛(wèi)生廳“興衛(wèi)工程”開放項目(XK15200901,ZX05200905)
【分類號】：R329.27

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1502717