本文關(guān)鍵詞： 高氧 肺損傷 線粒體 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞色素c 半胱氨酸蛋白酶-3 大鼠　出處：《廣州醫(yī)學(xué)院》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：高氧肺損傷發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,氧化應(yīng)激反應(yīng)和活性氧(reactive oxygen specie,ROS)的產(chǎn)生在其發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色,線粒體是細(xì)胞活動(dòng)的主要供能場(chǎng)所,是機(jī)體物質(zhì)代謝和能量轉(zhuǎn)化的中心,三梭酸循環(huán)、呼吸鏈電子傳遞及氧化磷酸化均在此進(jìn)行,它是細(xì)胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生的主要部位和氧化損傷的靶細(xì)胞器。除了產(chǎn)生ATP供給細(xì)胞所需能量外,線粒體對(duì)細(xì)胞氧化還原狀態(tài)和滲透壓調(diào)節(jié)、鈣穩(wěn)態(tài)、PH維持及細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)起重要作用。隨著高氧肺損傷機(jī)制研究的增多,細(xì)胞凋亡在肺損傷中作用日益得到重視,研究高氧肺損傷線粒體凋亡通路相關(guān)機(jī)制及減少其凋亡是防治新生兒肺損傷的一個(gè)新策略。 目的 觀察線粒體凋亡通路細(xì)胞色素C(Cytochrome c,Cytc)、caspase-3在新生大鼠高氧肺損傷模型動(dòng)態(tài)表達(dá)及關(guān)聯(lián),研究高氧肺損傷的線粒體凋亡通路的可能機(jī)制及意義,為進(jìn)一步預(yù)防和治療高氧肺損傷奠定實(shí)驗(yàn)和理論基礎(chǔ)。 方法 1.新生Sprague-Dawley(SD)大鼠生后立即隨機(jī)分為空氣組、高氧組,每組取動(dòng)物24只。高氧組持續(xù)暴露于≥95%氧氣中,建立高氧肺損傷模型,空氣組置于同一室內(nèi)常壓空氣中。每組又分四個(gè)亞組,每個(gè)亞組6只大鼠。兩組分別于暴露滿1、2、3、4 d時(shí)取標(biāo)本進(jìn)行研究。 2.光學(xué)顯微鏡觀察各組新生大鼠肺組織形態(tài)學(xué)變化,透射電鏡觀察各組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(Alveolar epithelial cell typeⅡ,AECⅡ)超微結(jié)構(gòu)變化,原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TUNEL法)計(jì)算細(xì)胞凋亡指數(shù)。 3.免疫印跡(Western-blot)法檢測(cè)各組胞漿和線粒體內(nèi)Cytc表達(dá),免疫組化法檢測(cè)caspase-3蛋白的分布和表達(dá)。 結(jié)果 1.光學(xué)顯微鏡觀察各組肺組織形態(tài)學(xué)變化顯示: 1d和2d的高氧組肺組織與空氣組比無明顯改變; 3d、4d時(shí)可見肺泡壁變薄,肺泡腔大小不均一,肺泡炎性改變:肺泡腔內(nèi)可見少許死亡脫落細(xì)胞及炎癥細(xì)胞滲出,肺間質(zhì)水腫,小血管擴(kuò)張、充血等。 2.透射電鏡觀察AECⅡ超微結(jié)構(gòu)變化示:與空氣組相比高氧組AECⅡ出現(xiàn)不同程度板層小體空泡化,線粒體腫脹,嵴破壞,基質(zhì)密度改變,甚至細(xì)胞核染色質(zhì)改變,以高氧2d,3d、4d組表現(xiàn)明顯。 3. TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果示:空氣組可見少量凋亡細(xì)胞,高氧組1 d、2d凋亡指數(shù)(%)為5.22±0.33、8.01±0.86與空氣組相比無明顯變化(P0.05);3d、4 d時(shí)其凋亡指數(shù)上升,分別為15.17±2.29、23.48±4.07與空氣組相比有顯著差異(P0.01)。陽性染色主要見于AECⅡ、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和支氣管上皮細(xì)胞。 4.肺組織胞漿及線粒體細(xì)胞色素C蛋白表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化:生后第2天高氧組胞漿內(nèi)Cytc蛋白相對(duì)水平為0.82±0.14,第3天為1.37±0.11,第4天為1.20±0.11,均高于相對(duì)應(yīng)空氣組(分別為0.23±0.04,0.24±0.03,0.24±0.02)(P均0.01);生后第2天高氧組線粒體內(nèi)Cytc蛋白相對(duì)水平為0.72±0.04,第3天為0.41±0.06,第4天為0.23±0.05,均低于相對(duì)應(yīng)空氣組(分別為1.31±0.13,1.34±0.06,1.29±0.05)(P均0.01)。 5.肺組織caspase-3蛋白含量表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化水平:caspase-3免疫組化陽性染色主要表達(dá)于肺泡上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、支氣管上皮和肺間質(zhì)細(xì)胞胞漿中。生后第3天高氧組caspase-3灰度值為94.96±8.95,第4天為91.27±10.64均低于相對(duì)應(yīng)空氣組(分別為102.65±8.44,102.2±7.29)(P0.05)。注:灰度值越低,表達(dá)越強(qiáng)。 6.凋亡指數(shù)與肺組織Cytc蛋白、caspase-3表達(dá)的相關(guān)性:凋亡指數(shù)與胞漿Cytc蛋白表達(dá)呈正相關(guān),r=0.58,P0.01;凋亡指數(shù)線與線粒體Cytc蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān),r=-0.921,P0.01;凋亡指數(shù)與Caspase-3灰度值表達(dá)呈負(fù)相關(guān),r=-0.573,P0.01。 結(jié)論 1.短時(shí)間高氧暴露可致新生大鼠肺組織產(chǎn)生急性肺損傷炎性表現(xiàn)。隨著高氧暴露時(shí)間延長(zhǎng)AECⅡ超微結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,且肺細(xì)胞凋亡指數(shù)升高。 2.高氧暴露可致新生大鼠肺組織Cytc由線粒體釋放至胞漿,Cytc分布發(fā)生變化,可能通過激活caspase-3進(jìn)而導(dǎo)致線粒體途徑介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,從而導(dǎo)致高氧肺損傷。 3. Cytc釋放、caspase-3表達(dá)與細(xì)胞凋亡指數(shù)及肺線粒體形態(tài)的動(dòng)態(tài)變化具有相關(guān)性。
[Abstract]:楂樻哀鑲烘崯浼ゅ彂鐥呮満鍒跺皻鏈畬鍏ㄩ槓鏄，

本文編號(hào)：1502694